標記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB)

                 標記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB)          

標記的鏈霉卵白素-生物素法(LSAB法)是標記的卵白素技術(shù)，20世紀80年代開始采用。

基本試劑：
① 第一抗體；
② 生物素化第二抗體；
③ 辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素。

實驗方法：
1. 將固定后的標本用PBS漂洗；
2. 于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來密封內(nèi)源性過氧化物酶；
3. TBS漂洗3次，每次1min；
4. 在室溫下用二抗的正常血清孵育20min；
5. 滴加一抗后在室溫下放置1h或4℃冰箱內(nèi)過夜；
6. TBS漂洗3次，每次1min；
7. 滴加二抗后于室溫放置30min；
8. 將標本于生物素化的第二抗體在室溫孵育10min；
9. TBS沖洗3次，每次1min；
10. 再與稀釋的LSAB在室溫孵育10min；
11. 重復(fù)步驟9；
12. 用DAB或AEC顯色；
13. 用蒸餾水反復(fù)沖洗；
14. 用蘇木精復(fù)染；
15. 封片；