細(xì)胞轉(zhuǎn)染好壞的重要因素

培養(yǎng)條件影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的成敗

1） DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：轉(zhuǎn)染操作中復(fù)合物稀釋液的PH值變化很重要（個人經(jīng)驗：某次轉(zhuǎn)染一批細(xì)胞中，有一孔的稀釋液與其他的不是同一管，結(jié)果感覺此孔的熒光比其他較強(qiáng)。 但是要得出結(jié)論需要反復(fù)驗證，排除細(xì)胞狀態(tài)差異，隨機(jī)差異）。注意觀察培養(yǎng)基顏色。

2） 培養(yǎng)基的“新鮮”：保證培養(yǎng)基的新鮮，忌諱轉(zhuǎn)染實驗時更換培養(yǎng)基體系，盡量減少試劑或添加劑的變更。

3 )營養(yǎng)的保證：血清、二氧化碳濃度稍微變化，會對結(jié)果有很大影響。

4 )杜絕有任何可能性污染時進(jìn)行轉(zhuǎn)染實驗：化學(xué)物質(zhì)、細(xì)菌、真菌的污染，還有細(xì)胞與細(xì)胞的交叉污染。
質(zhì)粒載體DNA的質(zhì)量也是轉(zhuǎn)染好壞的重要因素
1)一般原則：對純化所得的載體進(jìn)行質(zhì)量鑒定，在轉(zhuǎn)讓時一定要選用一種已知具有功能的載體做對照。
2)載體的完整性：書面報告中核實載體元件（啟動子/增強(qiáng)子/ORI等等）。
3) 載體的制備質(zhì)量：純化質(zhì)量情況，是否有其他載體交叉污染，制備產(chǎn)物中殘余的污染物（如氯仿、酒精、CsCl、內(nèi)毒素）可能會影響轉(zhuǎn)染效率。