其它試劑類注意事項(xiàng)與操作技巧

其它試劑類​注意事項(xiàng)：

１．其它試劑類反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。

２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。

３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。

４．PCR試劑配制應(yīng)使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。

６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。

７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

其它試劑類操作技巧：

1.操作前應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度（保持在18 C～25℃）、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗刷的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，其它試劑類是否符合要求。

2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)筆直參加標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次第要與說明書一起，否則可導(dǎo)致效果過錯(cuò)，試驗(yàn)重復(fù)性差。

3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗刷次數(shù)不要逾越說明書舉薦的洗刷次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)停留的時(shí)間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，形成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。

4.要保證加液量一起 我們在使用時(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量禁絕，形成顯色不一致，判別過錯(cuò)。

 5.顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，避免顯色過強(qiáng)。為了減小過失，是先稀釋再加樣。