Elisa試劑盒使用方法與實(shí)驗(yàn)原理

Elisa試劑盒​實(shí)驗(yàn)原理：

Elisa試劑盒​應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）水平。用純化的兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9），再與HRP標(biāo)記的MMP-9抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）濃度。

Elisa試劑盒使用方法：

一、樣品 RNA 的制備

1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

 
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）

2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。

3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。

4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。

5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰