Countstar Rigel全自動熒光細胞分析儀在單細胞測序中的應(yīng)用

一 單細胞測序
單細胞測序技術(shù)(scs)是指在單個細胞水平上對其攜帶的遺傳信息進行測序，獲得某種細胞類型的基因序列等信息并進行整合分析，目前廣泛應(yīng)用于新物種鑒定、病原篩查、病原進化、發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、腫瘤異質(zhì)性研究以及循環(huán)腫瘤細胞等。該技術(shù)在2013年榮膺《自然-方法》年度技術(shù)。目前主要的方法為10x Genomics。
 
二 單細胞測序技術(shù)實例
1. 多重退火和成環(huán)循環(huán)擴增技術(shù)
主要研發(fā)人：哈佛大學(xué)終身教授、美國科學(xué)院院士謝曉亮教授
技術(shù)看點：降低PCR擴增偏倚，使得單細胞中93%的基因組能夠被測序。這種方法使得檢測單細胞中較小的DNA序列變異變得更容易，因此能夠發(fā)現(xiàn)個別細胞之間的遺傳差異。
 
2. 基于芯片實驗室技術(shù)的單細胞測序
主要研發(fā)人：斯坦福大學(xué)Stephen Quake
技術(shù)看點：基于lap on a chip開發(fā)
 
3. 基于MDA的單細胞測序
主要研發(fā)人：深圳華大基因研究院
技術(shù)看點：將多重置換擴增(MDA)和測序技術(shù)相結(jié)合
 
4. Strand-seq
主要研發(fā)人：加拿大英屬哥倫比亞大學(xué)Peter Lansdorp
技術(shù)看點：能捕捉DNA一條鏈上的信息，使得研究人員對于親本DNA模板鏈進行DNA測序，避免單細胞DNA擴增和測序時丟失定向信息。
 

• 單細胞測序收樣與樣本制備過程中的注意事項

1. 樣本類型：細胞(植物細胞需要制備成原生質(zhì)體)、組織(一般需要鮮樣不可冷凍)、血液
2.最適上機檢測濃度：7x10⁵-1.2x10⁶個/ml
3.細胞活率：細胞活率大于70%
4. 細胞大�。盒∮�40μm
5.細胞結(jié)團率：小于10%
 

• Rigel在單細胞測序中的應(yīng)用

單細胞測序技術(shù)對于樣本濃度、活率、結(jié)團率有著較高的要求，特別是對于從組織中消化下來的細胞，由于細胞內(nèi)含有碎片和雜質(zhì)，傳統(tǒng)的計數(shù)方法不能有效的排除掉碎片和雜質(zhì)在計數(shù)過程中帶來的干擾。

Countstar Rigel 全自動熒光細胞分析儀是一款基于圖像法檢測，配合多熒光通道，通過采集圖像中的細胞信息，進行定量分析。它將熒光顯微成像與統(tǒng)計學(xué)群體分析結(jié)合于一身，既能提供細胞群的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，又可以獲得單個細胞的圖像，從而提供細胞形態(tài)學(xué)信息，獨特的圖像采集同時產(chǎn)生明場以及熒光圖像，使結(jié)果更為直觀。它結(jié)合AO(吖啶橙)和PI(碘化吡啶)兩種核酸染料(圖1)，可以排除雜質(zhì)和碎片的干擾(圖2)，從而得到準確的計數(shù)結(jié)果(圖3)。

 

       
Countstar Rigel應(yīng)用在單細胞測序中的文章 文章地址：https://doi.org/10.1016/j.stemcr.2020.09.008