貼壁細(xì)胞傳代流程

貼壁細(xì)胞傳代流程：
1. 取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。
2. 從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意培養(yǎng)瓶取出細(xì)胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。
3. 將培養(yǎng)瓶放入超凈工作臺后打開瓶口，同時要在酒精燈上燒口消毒。
4. 加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞較好好，消化溫度是 37℃。
5. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時細(xì)胞消化適度。
6. 棄去胰蛋白酶液，加入新鮮的培養(yǎng)液終止反應(yīng)。小心吹打成細(xì)胞懸液。
7. 將細(xì)胞懸液吸入 10 ml 離心管中。平衡后將離心管放入離心機(jī)中，以 1000 rpm/min 離心 5 min。
8. 棄去上清液，加入適當(dāng)體積的培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。
9. 將細(xì)胞懸液吸出分裝至 2 - 3 個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。
10. 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要時計(jì)數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于 5×105 /ml。最后要做好標(biāo)記。
11. 繼續(xù)培養(yǎng)：用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入 CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞 2 - 4 h 后開始貼附在瓶壁上。