血清使用中的常見問題解答
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。
一、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
未拆封的血清，一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃，在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用，若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi)，再放回冷凍。
將血清從冷凍冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融，或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。完全溶解后建議盡快使用，若長時間儲存在2-8℃，血清中的各種（脂）蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。
總而言之：血清推薦在-10至-20℃條件儲存，并避免反復(fù)凍融。
二、血清中絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?
1.將冷凍保存的血清取出后，置4℃冰箱靜止過夜；
2.待血清融化后，上下顛倒，輕輕混勻，繼續(xù)4℃2-3小時；
3.輕輕吸取上層血清，分裝，余底下50ml左右；
4.低速離心5分鐘，去掉沉淀。
若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該怎么處理?
胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后，也會存在于胎牛血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響胎牛血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將胎牛血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。
解凍胎牛血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，胎牛血清會變得混濁，同時胎牛血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響胎牛血清的質(zhì)量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。
三、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？
1.解凍時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一；
2.分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡）；
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍，較大的溫差，易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀；
4.切勿將血清置于37℃過長時間，否則可能使之渾濁，其中一些不穩(wěn)定的組分也會因此受到影響，最終降低血清的品質(zhì)；
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟；
6.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且保持搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
四、血清中的“黑膠蟲”是怎么回事？
在細(xì)胞培養(yǎng)的時候，有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動，小黑點(diǎn)有時呈點(diǎn)狀，有時呈小的片狀，運(yùn)動形式為在原地振動，類似布朗運(yùn)動，這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌，也不是支原體，目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲”。
黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。黑膠蟲一般是存在血清里的，而血清通常是經(jīng)過0.1μm濾膜過濾的，所以血清里不可能存在細(xì)菌、霉菌及支原體等微生物。如果說黑膠蟲不是生物，它會不斷增多，達(dá)到一定數(shù)量時會與細(xì)胞競爭性生長，與細(xì)胞競爭培養(yǎng)基中的營養(yǎng)，從而使得細(xì)胞營養(yǎng)不足而死亡。
一、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
未拆封的血清，一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃，在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用，若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi)，再放回冷凍。
將血清從冷凍冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融，或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。完全溶解后建議盡快使用，若長時間儲存在2-8℃，血清中的各種（脂）蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。
總而言之：血清推薦在-10至-20℃條件儲存，并避免反復(fù)凍融。
二、血清中絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?
1.將冷凍保存的血清取出后，置4℃冰箱靜止過夜；
2.待血清融化后，上下顛倒，輕輕混勻，繼續(xù)4℃2-3小時；
3.輕輕吸取上層血清，分裝，余底下50ml左右；
4.低速離心5分鐘，去掉沉淀。
若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該怎么處理?
胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在胎牛血清解凍后，也會存在于胎牛血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響胎牛血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將胎牛血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙枞倪^濾膜。
解凍胎牛血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，胎牛血清會變得混濁，同時胎牛血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響胎牛血清的質(zhì)量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。
三、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？
1.解凍時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一；
2.分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡）；
3.切勿由-20℃直接至37℃水浴鍋解凍，較大的溫差，易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀；
4.切勿將血清置于37℃過長時間，否則可能使之渾濁，其中一些不穩(wěn)定的組分也會因此受到影響，最終降低血清的品質(zhì)；
5.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟；
6.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且保持搖晃均勻。溫度過高、時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
四、血清中的“黑膠蟲”是怎么回事？
在細(xì)胞培養(yǎng)的時候，有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點(diǎn)在動，小黑點(diǎn)有時呈點(diǎn)狀，有時呈小的片狀，運(yùn)動形式為在原地振動，類似布朗運(yùn)動，這種小黑點(diǎn)既不是細(xì)菌、霉菌，也不是支原體，目前業(yè)內(nèi)人士稱其為“黑膠蟲”。
黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。黑膠蟲一般是存在血清里的，而血清通常是經(jīng)過0.1μm濾膜過濾的，所以血清里不可能存在細(xì)菌、霉菌及支原體等微生物。如果說黑膠蟲不是生物，它會不斷增多，達(dá)到一定數(shù)量時會與細(xì)胞競爭性生長，與細(xì)胞競爭培養(yǎng)基中的營養(yǎng)，從而使得細(xì)胞營養(yǎng)不足而死亡。
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