細(xì)胞計數(shù)常見問題及針對性解決方案:提升計數(shù)質(zhì)量、優(yōu)化實驗流程
瀏覽次數(shù):662 發(fā)布日期:2025-5-29
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在日常細(xì)胞實驗中,細(xì)胞計數(shù)是不可或缺的一步。然而,看似簡單的計數(shù),背后卻隱藏著不少“雷區(qū)”。本期我們整理了細(xì)胞計數(shù)中常見的問題、原因分析及快速解決方案,助你提升實驗效率!
1. 常見的問題、原因分析及快速解決方案
1.1 計數(shù)誤差大、重復(fù)性差
#可能原因
- 混勻不充分,細(xì)胞分布不均
- 使用血球計數(shù)板時進(jìn)樣不規(guī)范
- 細(xì)胞團(tuán)聚,單細(xì)胞比例低
#快速解決方案
- 吹打混勻 ≥5次再取樣
- 加入DNA酶(如DNase I)或EDTA防止細(xì)胞團(tuán)聚
- 規(guī)范操作,避免氣泡進(jìn)入計數(shù)板
1.2 死細(xì)胞比例過高
#可能原因
- 胰酶消化時間過長,細(xì)胞膜受損
- 離心力過大或時間過長導(dǎo)致細(xì)胞受損
- 計數(shù)染料(如臺盼藍(lán))濃度不合理
#快速解決方案
- 嚴(yán)控消化時間,推薦1–3分鐘觀察狀態(tài)
- 軟離心(300–400g,3–5分鐘)
- 使用新鮮、適當(dāng)濃度的染料(臺盼藍(lán) 0.4%常規(guī)推薦1:1稀釋)
1.3自動計數(shù)系統(tǒng)識別異常
#可能原因
- 背景雜質(zhì)較多或氣泡干擾
- 設(shè)置參數(shù)不匹配細(xì)胞類型
- 圖像聚焦不清晰,識別誤判
#快速解決方案
- 預(yù)過濾細(xì)胞懸液(如40 μm濾網(wǎng))
- 調(diào)整識別閾值、大小范圍等算法參數(shù)
- 確保樣本放置平穩(wěn)、系統(tǒng)自動對焦良好
2. 技術(shù)加分項:提升計數(shù)質(zhì)量的小技巧
- 細(xì)胞懸液濃度控制在 1×10⁵ – 1×10⁶/mL,利于計數(shù)準(zhǔn)確
- 定期校準(zhǔn)自動計數(shù)儀器或更換血球板
- 使用帶有自動識別和圖像記錄功能的系統(tǒng),如NanoEntek EVE明場系列/ADAM熒光系列細(xì)胞計數(shù)分析儀,可視化追蹤細(xì)胞狀態(tài)
細(xì)胞計數(shù)是一個“看起來簡單、做起來精細(xì)”的步驟。掌握關(guān)鍵細(xì)節(jié),避免常見誤區(qū),能顯著提升后續(xù)實驗的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。
接下來將介紹一款世界質(zhì)量認(rèn)證白金獎自動細(xì)胞計數(shù)儀——EVE™ PLUS 超快速自動細(xì)胞計數(shù)儀,助力實驗準(zhǔn)確高效、減少誤差。
3. 設(shè)備速覽

EVE™ PLUS超快速自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)原理主要基于圖像分析技術(shù),結(jié)合染色和先進(jìn)的算法來實現(xiàn)對細(xì)胞的準(zhǔn)確計數(shù)。以下是其主要工作原理:
#1 臺盼藍(lán)染色
在進(jìn)行計數(shù)之前,細(xì)胞樣本與臺盼藍(lán)染料混合。健康的細(xì)胞具有完整的細(xì)胞膜,其能夠阻止臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,但當(dāng)細(xì)胞死亡或者細(xì)胞膜受損時,臺盼藍(lán)則能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)從而染色細(xì)胞質(zhì)使其呈現(xiàn)藍(lán)色。
#2 LED光學(xué)系統(tǒng)與CMOS檢測技術(shù)
# LED光學(xué)系統(tǒng)
LED光源為細(xì)胞提供均勻且穩(wěn)定的照明環(huán)境,有助于提高圖像質(zhì)量和清晰度。
# CMOS檢測技術(shù)
結(jié)合高靈敏度的CMOS傳感器,EVE™ PLUS能夠捕捉并記錄圖像。CMOS傳感器具有高速、高靈敏度和低噪聲等優(yōu)點,能夠確保圖像數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。
#3 圖像分析
EVE™ PLUS內(nèi)置的系統(tǒng)算法會對捕捉到的圖像進(jìn)行分析。通過識別圖像中的細(xì)胞形態(tài)和染色特征(如臺盼藍(lán)染色的藍(lán)色細(xì)胞)區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。
#4 計數(shù)與數(shù)據(jù)輸出
根據(jù)圖像分析的結(jié)果,EVE™ PLUS自動計算出樣本中的細(xì)胞總數(shù)、活/死細(xì)胞數(shù)以及細(xì)胞活率,并以圖表及圖片格式輸出。
4. 功能簡介
EVE™ PLUS超快速自動細(xì)胞計數(shù)儀作為一款先進(jìn)的細(xì)胞分析設(shè)備,能夠準(zhǔn)確、簡單、快速的提供細(xì)胞數(shù)量以及細(xì)胞存活率。其功能具體如下:
4.1 細(xì)胞計數(shù)&存活率分析
EVE™ PLUS超快速自動細(xì)胞計數(shù)儀通過臺盼藍(lán)染色,可獲得活/死細(xì)胞數(shù)量以及細(xì)胞存活率。
4.2 手動&自動聚焦功能
# 自動聚焦
10秒內(nèi)獲得細(xì)胞總數(shù)、活/死細(xì)胞數(shù)、存活率、細(xì)胞濃度和細(xì)胞直徑大小等結(jié)果。
# 手動聚焦
1秒內(nèi)獲得細(xì)胞總數(shù)、活/死細(xì)胞數(shù)、存活率、細(xì)胞濃度和細(xì)胞直徑大小等結(jié)果。
4.3 細(xì)胞大小閥門調(diào)節(jié)
EVE™ PLUS可自定義調(diào)整細(xì)胞大小閥門。通過調(diào)整閥門大小可排除細(xì)胞碎片干擾。
4.4 成團(tuán)細(xì)胞單獨計數(shù)
EVE™ PLUS能夠識別和計數(shù)成團(tuán)細(xì)胞中的單個細(xì)胞,從而進(jìn)行準(zhǔn)確的分析。
4.5 數(shù)據(jù)存儲
細(xì)胞計數(shù)完成后,結(jié)果可自動存儲在設(shè)備中,避免數(shù)據(jù)丟失。
4.6 網(wǎng)絡(luò)連接
EVE™ PLUS提供網(wǎng)卡,可連接WIFI進(jìn)行郵件發(fā)送或者遠(yuǎn)程操作。