科普抗體標(biāo)記常見種類

標(biāo)記抗體是免疫電鏡樣品制備的一種常見方法，該技術(shù)由于操作簡(jiǎn)單、靈敏度高，常應(yīng)用于IHC，WB，ICC，ELISA等實(shí)驗(yàn)。通過(guò)標(biāo)記物的增強(qiáng)放大效應(yīng)來(lái)定位分析抗原，是目前市面上理想的快速價(jià)廉的定量檢測(cè)方法�？贵w標(biāo)記主要有酶標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、同位素標(biāo)記、生物素標(biāo)記等，還有一些其他的標(biāo)記方法例如膠體金標(biāo)記，下面具體來(lái)展示抗體標(biāo)記種類：

1、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記，HRP標(biāo)記單抗和多抗的常用方法是過(guò)碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基被氧化成醛基，隨后與抗體蛋白的氨基結(jié)合，形成Schiff堿。常用的HRP的底物有鄰苯二胺（OPD）、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和ABTS等，其中TMB是最常用于 WB、ELISA等實(shí)驗(yàn)的底物顯色試劑，經(jīng)HRP作用后由無(wú)色變藍(lán)色，目測(cè)對(duì)比鮮明；加酸停止酶反應(yīng)后變黃色，可在比色計(jì)中定量。云克隆公司ELISA試劑盒中的檢測(cè)試劑B即為HRP標(biāo)記的抗體，再與TMB顯色底物反應(yīng)用于定量檢測(cè)。

2、異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記，F(xiàn)ITC是最常用的熒光素，其原理是在堿性條件下，F(xiàn)ITC 的異硫氰基能與IgG的自由氨基結(jié)合，形成IgG與熒光素的結(jié)合物，該熒光被捕捉后即可被檢測(cè)到，目前市面上這種標(biāo)記抗體大多被選擇作為熒光二抗，可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色。通過(guò)熒光顯微鏡或者流式細(xì)胞儀分析可對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量的檢測(cè)。
          
3、生物素（Biotin）標(biāo)記，現(xiàn)在應(yīng)用廣泛的是生物素-親合素系統(tǒng)，生物素與親和素之間高親和力的牢固結(jié)合以及級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，標(biāo)記蛋白質(zhì)這類大分子，再通過(guò)顯色系統(tǒng)可以定量或者半定量地進(jìn)行抗原分析。

4、膠體金標(biāo)記（GICT），蛋白質(zhì)可與膠體金顆粒通過(guò)靜電結(jié)合從而被吸附到其表面，由于膠體金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒。由于檢測(cè)結(jié)果直接可以用顏色顯示，肉眼判斷容易，無(wú)需儀器設(shè)備，特別適合廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)者以及偏遠(yuǎn)地區(qū)等應(yīng)用。該標(biāo)記技術(shù)已納入公司的研發(fā)項(xiàng)目，廣大的科研工作者很快就能獲得此類的標(biāo)記抗體。

5、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，使用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗體，常用的標(biāo)記發(fā)光劑是魯米諾類，采用增強(qiáng)型的ECL發(fā)光體系作為發(fā)光底物試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)標(biāo)記檢測(cè)，云克隆公司的化學(xué)發(fā)光試劑盒即采用這一標(biāo)記技術(shù)，用于定量檢測(cè)相關(guān)蛋白等物質(zhì)。