GL261細胞培養(yǎng)傳代步驟及常見問題解決方案
細胞簡介
GL261細胞是于1939年通過將3-甲基膽蒽顱內(nèi)注射到C57BL/6小鼠中誘導(dǎo)產(chǎn)生的大腦膠質(zhì)瘤細胞，在20世紀(jì)90年代中期從Gl261腫瘤中建立體外生長細胞。文獻報道GL261細胞攜帶TP53和KRAS突變。
細胞信息
細胞名稱：glioma261小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
別稱：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生長特性：成纖維細胞樣、貼壁生長
倍增時間：~100-120小時（DSMZ=ACC-802）
細胞培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-100）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%ps（貨號：CSP006）
溫度：37℃
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）
細胞特性：該細胞生長緩慢、培養(yǎng)過程中有漂浮細胞。
傳代步驟
吸液：吸出原培養(yǎng)液;
潤洗：加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;
消化：放入培養(yǎng)箱消化，顯微鏡下看到細胞回縮細胞變圓、有明顯間隙（約2-4min），輕輕晃動培養(yǎng)培養(yǎng)瓶（皿），細胞大部分脫落時直到80%脫落可終止，加入3-5mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞3-8下培養(yǎng)瓶使細胞全部脫落；
離心：收集細胞懸液到離心管進行離心，1000rpm/min 5分鐘，離心完吸出上清丟棄；
加培養(yǎng)基：加入新鮮培養(yǎng)基，按比例接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，畫8字法混勻細胞，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，后續(xù)觀察細胞生長情況。
常見問題
1、當(dāng)你的細胞收到是如下狀態(tài)時，該如何處理?
運輸會導(dǎo)致該細胞皺縮，脫落、聚集等情況，當(dāng)收到細胞皺縮、脫落時，可以先噴酒精，擦拭干凈細胞瓶表面。放入培養(yǎng)箱靜止2-4h,一般靜置后細胞會恢復(fù)，細胞會再次貼壁。在密度沒有達到80%的時候可以把培養(yǎng)基吸出。添加完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，次日觀察。當(dāng)細胞密度有80%以上且部分細胞堆積時，可按照上面步驟進行傳代，一般傳代后細胞會恢復(fù)。
2、培養(yǎng)過程中有碎片、黑點變多、液體變濃稠
GL261細胞具有達爾頓抗原neu轉(zhuǎn)化基因，p815蛋白質(zhì)與膠質(zhì)母細胞瘤密切相關(guān)，p185與表皮生長因子受體在血清受體血學(xué)上相似，具有分泌功能，分泌物質(zhì)是濃稠的1.1、所以細胞培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基會變濃稠，換液時能明顯感受到液體會有拉絲的情況，特別是細胞密度高換液時候較明顯。
2.1細胞凋亡后會產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì)，在顯微鏡下呈黑點狀。屬于正�，F(xiàn)象；
2.2 該細胞生長過程中，培養(yǎng)基中始終有少量漂浮的細胞及碎片，背景中可看到少量黑點，換液可暫時改善，但繼續(xù)培養(yǎng)漂浮細胞仍會出現(xiàn)。這是細胞特性無法避免。以上都是常見現(xiàn)象，不影響細胞增殖和實驗；
3、生長緩慢
細胞生長偏慢時，可以提高5-10%血清濃度（血清總濃度不超過 20%）培養(yǎng)一段時間，待細胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回正常血清濃度。
4、漂浮細胞太多
該細胞貼壁展開較慢，個體較大，復(fù)蘇、傳代24h后大部分細胞呈不規(guī)則多邊形或圓形，細胞形態(tài)未完全展開，此時不用換液處理，48h后可見細胞開始成片聚集生長；新復(fù)蘇培養(yǎng)細胞，可見較多漂浮，復(fù)蘇48h內(nèi)可先不換液，保留漂浮細胞繼續(xù)貼壁；如果傳代后貼壁細胞少，或貼壁不牢固，可購買纖連蛋白或多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶輔助細胞貼壁。
消化傳代時，把控好消化時間。吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免造成細胞碎裂增多。
GL261細胞是于1939年通過將3-甲基膽蒽顱內(nèi)注射到C57BL/6小鼠中誘導(dǎo)產(chǎn)生的大腦膠質(zhì)瘤細胞，在20世紀(jì)90年代中期從Gl261腫瘤中建立體外生長細胞。文獻報道GL261細胞攜帶TP53和KRAS突變。
細胞信息
細胞名稱：glioma261小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
別稱：Glioma 261; GLIOMA 261; Glioma-261; GL-261
生長特性：成纖維細胞樣、貼壁生長
倍增時間：~100-120小時（DSMZ=ACC-802）
細胞培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）基礎(chǔ)培養(yǎng)基（貨號：ZQ-100）+10%FBS（貨號：ZQ0500）+1%ps（貨號：CSP006）
溫度：37℃
換液頻次：2~3次/周
傳代比例：1:2-1:4（具體情況視實際細胞量決定）
細胞特性：該細胞生長緩慢、培養(yǎng)過程中有漂浮細胞。
傳代步驟
吸液：吸出原培養(yǎng)液;
潤洗：加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄;
加酶：加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;
消化：放入培養(yǎng)箱消化，顯微鏡下看到細胞回縮細胞變圓、有明顯間隙（約2-4min），輕輕晃動培養(yǎng)培養(yǎng)瓶（皿），細胞大部分脫落時直到80%脫落可終止，加入3-5mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞3-8下培養(yǎng)瓶使細胞全部脫落；
離心：收集細胞懸液到離心管進行離心，1000rpm/min 5分鐘，離心完吸出上清丟棄；
加培養(yǎng)基：加入新鮮培養(yǎng)基，按比例接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，畫8字法混勻細胞，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，后續(xù)觀察細胞生長情況。
常見問題
1、當(dāng)你的細胞收到是如下狀態(tài)時，該如何處理?
運輸會導(dǎo)致該細胞皺縮，脫落、聚集等情況，當(dāng)收到細胞皺縮、脫落時，可以先噴酒精，擦拭干凈細胞瓶表面。放入培養(yǎng)箱靜止2-4h,一般靜置后細胞會恢復(fù)，細胞會再次貼壁。在密度沒有達到80%的時候可以把培養(yǎng)基吸出。添加完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，次日觀察。當(dāng)細胞密度有80%以上且部分細胞堆積時，可按照上面步驟進行傳代，一般傳代后細胞會恢復(fù)。
2、培養(yǎng)過程中有碎片、黑點變多、液體變濃稠
GL261細胞具有達爾頓抗原neu轉(zhuǎn)化基因，p815蛋白質(zhì)與膠質(zhì)母細胞瘤密切相關(guān)，p185與表皮生長因子受體在血清受體血學(xué)上相似，具有分泌功能，分泌物質(zhì)是濃稠的1.1、所以細胞培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基會變濃稠，換液時能明顯感受到液體會有拉絲的情況，特別是細胞密度高換液時候較明顯。
2.1細胞凋亡后會產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì)，在顯微鏡下呈黑點狀。屬于正�，F(xiàn)象；
2.2 該細胞生長過程中，培養(yǎng)基中始終有少量漂浮的細胞及碎片，背景中可看到少量黑點，換液可暫時改善，但繼續(xù)培養(yǎng)漂浮細胞仍會出現(xiàn)。這是細胞特性無法避免。以上都是常見現(xiàn)象，不影響細胞增殖和實驗；
3、生長緩慢
細胞生長偏慢時，可以提高5-10%血清濃度（血清總濃度不超過 20%）培養(yǎng)一段時間，待細胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回正常血清濃度。
4、漂浮細胞太多
該細胞貼壁展開較慢，個體較大，復(fù)蘇、傳代24h后大部分細胞呈不規(guī)則多邊形或圓形，細胞形態(tài)未完全展開，此時不用換液處理，48h后可見細胞開始成片聚集生長；新復(fù)蘇培養(yǎng)細胞，可見較多漂浮，復(fù)蘇48h內(nèi)可先不換液，保留漂浮細胞繼續(xù)貼壁；如果傳代后貼壁細胞少，或貼壁不牢固，可購買纖連蛋白或多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶輔助細胞貼壁。
消化傳代時，把控好消化時間。吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免造成細胞碎裂增多。
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