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抗豬藍(lán)耳病毒N蛋白單克隆抗體(5H1株)的核心參數(shù)說(shuō)明

瀏覽次數(shù):141 發(fā)布日期:2025-7-22  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
抗豬藍(lán)耳病毒(PRRSV)N 蛋白單克隆抗體(5H1 株)的核心參數(shù)(特異性、交叉率、靈敏度等)通常需基于具體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證數(shù)據(jù),不同實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)廠(chǎng)家的制備工藝可能導(dǎo)致參數(shù)存在差異。以下是該類(lèi)抗體核心參數(shù)的典型定義、常見(jiàn)范圍及相關(guān)說(shuō)明,供參考:

一、特異性(Specificity)
定義:指抗體與目標(biāo)抗原(PRRSV N 蛋白)特異性結(jié)合,而不與其他無(wú)關(guān)抗原或結(jié)構(gòu)類(lèi)似物結(jié)合的能力。
核心驗(yàn)證指標(biāo): 
與 PRRSV N 蛋白的結(jié)合能力:通過(guò) ELISA、Western blot 等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,應(yīng)能高效識(shí)別天然或重組 PRRSV N 蛋白(如在病毒感染細(xì)胞裂解液中特異性條帶單一,無(wú)雜帶)。
與其他病毒蛋白的交叉反應(yīng):需排除與 PRRSV 其他結(jié)構(gòu)蛋白(如 GP5、M 蛋白)或非 PRRSV 病毒(如豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒、偽狂犬病病毒等)的交叉反應(yīng),通常要求無(wú)交叉結(jié)合或結(jié)合信號(hào)極低(OD 值 < 0.1,以陰性對(duì)照為基準(zhǔn))。
典型標(biāo)準(zhǔn):特異性強(qiáng)的抗體在檢測(cè)中僅與 PRRSV N 蛋白反應(yīng),對(duì)其他抗原無(wú)明顯結(jié)合,可用于 PRRSV 的特異性診斷。

二、交叉反應(yīng)率(Cross-reactivity)
定義:指抗體與非目標(biāo)抗原(如其他病毒、細(xì)菌或宿主蛋白)發(fā)生非特異性結(jié)合的概率,通常以 “無(wú)交叉反應(yīng)”“低交叉反應(yīng)” 或具體數(shù)值表示。
關(guān)鍵驗(yàn)證對(duì)象: 
PRRSV 不同基因型 / 亞型:PRRSV 分為歐洲型(Type 1)和美洲型(Type 2),N 蛋白在兩者間有一定保守性,5H1 株可能對(duì)兩種基因型均有反應(yīng)(交叉率高),或僅針對(duì)特定基因型(需明確)。
其他豬源病毒:如豬流感病毒(SIV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)等,優(yōu)質(zhì)抗體應(yīng)無(wú)交叉反應(yīng)(交叉率 < 1%)。
宿主細(xì)胞蛋白:如豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)裂解液中的蛋白,交叉反應(yīng)率需 < 1%,避免假陽(yáng)性。
典型標(biāo)準(zhǔn):針對(duì) PRRSV N 蛋白的特異性單抗,理想狀態(tài)為僅與 PRRSV(或特定基因型)反應(yīng),與其他病原體交叉率為 0。

三、靈敏度(Sensitivity)
定義:指抗體檢測(cè)到最低濃度目標(biāo)抗原(PRRSV N 蛋白)的能力,通常以檢測(cè)下限(LOD)表示。
常見(jiàn)檢測(cè)場(chǎng)景及靈敏度范圍: 
ELISA 檢測(cè):LOD 通常為 0.1-10 ng/mL(重組 N 蛋白);若檢測(cè)病毒培養(yǎng)物,可達(dá)到 10²-10³ TCID₅₀/mL(病毒滴度)。
Western blot:可檢測(cè)到微克級(jí)(μg)至納克級(jí)(ng)的 N 蛋白(取決于樣本處理和顯色系統(tǒng))。
免疫熒光(IFA)/ 免疫組化(IHC):能識(shí)別感染細(xì)胞內(nèi)低豐度的 N 蛋白,通?蓹z測(cè)到單個(gè)感染細(xì)胞中的抗原表達(dá)。
影響因素:抗體親和力、檢測(cè)方法的放大系統(tǒng)(如酶標(biāo)二抗的效價(jià))、樣本基質(zhì)(如血清、組織勻漿中的干擾物質(zhì))等。

四、其他核心參數(shù)
親和力(Affinity)
衡量抗體與抗原結(jié)合的強(qiáng)度,通常以平衡解離常數(shù)(Kd)表示,優(yōu)質(zhì)單抗的 Kd 值多在 10⁻⁸-10⁻¹¹ M(納摩爾至皮摩爾級(jí)),親和力越高,檢測(cè)靈敏度和特異性越優(yōu)。
效價(jià)(Titer)

指抗體能產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù),ELISA 中腹水抗體效價(jià)通常≥1:10⁵,重組抗體效價(jià)因純度高可能更高(≥1:10⁶),效價(jià)高意味著抗體可稀釋使用,降低實(shí)驗(yàn)成本。
穩(wěn)定性(Stability)

包括儲(chǔ)存穩(wěn)定性(如 - 20℃保存 6-12 個(gè)月活性無(wú)明顯下降)和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性(如耐受一定范圍的 pH、溫度變化),確保批間一致性和長(zhǎng)期使用效果。
五、參數(shù)驗(yàn)證的重要性
由于單克隆抗體的制備存在個(gè)體差異(即使同一株系 5H1,不同實(shí)驗(yàn)室傳代或培養(yǎng)條件可能影響性能),實(shí)際應(yīng)用前需通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:

特異性:用無(wú)關(guān)抗原做陰性對(duì)照,排除交叉反應(yīng);
靈敏度:通過(guò)梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)抗原確定檢測(cè)下限;
適用性:驗(yàn)證在目標(biāo)樣本類(lèi)型(如血清、組織、細(xì)胞)中的檢測(cè)效果。
 
發(fā)布者:杭州沸雪基因技術(shù)有限公司
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