單細胞懸液制備全流程介紹及相關(guān)注意事項

流式細胞術(shù)做為一種快速的細胞定量分析技術(shù)，能夠同時對單個細胞進行多種特征參數(shù)的檢測，如細胞大小、DNA含量、蛋白質(zhì)表達等，現(xiàn)已成為科研領(lǐng)域中不可或缺的重要工具。

流式檢測能順利進行的硬要求之一是，樣本必須能在鞘液中流動，因此，無論是培養(yǎng)的細胞，還是從各種組織中提取出來的細胞，都需要把待測樣本制備成單細胞懸液!制備欠妥的樣本，不僅會直接影響實驗的準確性和結(jié)果的可靠性，一些大的細胞團塊甚至?xí)�堵塞液流系統(tǒng)而影響儀器的正常運行。

實驗過程

1、取脾臟
頸椎脫臼法處死小鼠;在解剖臺上固定小鼠，從底端小心剪開小鼠整個腹部皮膚，暴露出小鼠腹膜;剪開小鼠腹膜，暴露出脾臟，摘取，并充分去除上面的脂肪組織;將取下的脾臟剪碎，置于預(yù)冷的PBS中浸泡待用

2、制備單細胞
使用凈信單細胞懸液制備儀，設(shè)置參數(shù)，點擊啟動，程序結(jié)束后加入終止液

3、裂解紅細胞
在離心后的細胞懸液中加入ACK紅細胞裂解液，重懸細胞，在室溫裂解5min

4、過濾洗滌
通過過濾網(wǎng)過濾，將過濾后的細胞懸液收集至離心管中，離心5min，去除上清液

5、單細胞計數(shù)
顯微鏡觀察細胞，使用染色緩沖液重懸細胞調(diào)整細胞濃度，吸取細胞懸液至流式管中，準備染色

結(jié)果分析：
 

小鼠脾臟活率99%，方便后續(xù)進行流式分析。

注意事項：
1.組織盡量剪碎，消化效果更好
2.摘取脾臟后，盡可能移除黏連的脂肪組織，提高脾臟細胞的占比
3.建議使用新鮮配制的紅細胞裂解液
4.消化后的細胞應(yīng)洗滌干凈，否則影響流式效果

單細胞懸液制備儀不僅效率高、溫和，保護細胞活性，還精準可控，適應(yīng)不同組織類型。高通量設(shè)計，提升實驗效率，對于需要處理多個樣本的研究項目，單細胞懸液制備儀的高通量設(shè)計可以同時處理多個樣本，大幅縮短實驗時間。選擇合適的儀器，可批量制備單細胞懸液，節(jié)約了實驗時間，根據(jù)需求選擇儀器中人體、小鼠各個組織、器官對應(yīng)程序，提高了單細胞懸液制備的活率和得率，使后續(xù)實驗進行更加順利。