飼料中總汞、總砷、總磷的應用方案
第一部分：飼料中汞、砷的測定
原理
動物源性食品是食品行業(yè)的中的重要組成，在其生產過程中，過量的有毒有害物質，特別是重金屬元素通過所飼養(yǎng)的動物排泄到土壤或水域中，對人類的生存環(huán)境構成威脅。為維護我國動物源性食品安全，農業(yè)農村部下達第194號文件，決定加強飼料商品管理。其中重金屬元素汞毒性強，是飼料樣品中重要的檢測指標。
試樣經酸加熱消解后。在酸性介質中,試樣中汞被硼氫化鉀(KBH.)或硼氫化鈉(NaBH,)還原成原子態(tài)汞,由載氣(氬氣帶人原子化器中，在特制汞空心陰極燈照射下，基態(tài)汞原子被激發(fā)至高能態(tài),在去活化回到基態(tài)時,發(fā)射出特征波長的黃光,其熒光強度與汞含量成正比，與標準系列比較定量。
標準依據(jù)GB/T 13081-2022；GB/T 13079-2022
儀器及試劑
AFS-680原子熒光光度計。
汞空心陰極燈；
砷空心陰極燈；
微波消解爐；
實驗室用樣品粉碎機或研缽。
硝酸( 優(yōu)級純)。
30%過氧化氫。
硫酸(優(yōu)級純)。
混合酸液硫酸 +硝酸+水(1+1+8):量取10 mL硝酸(4:2.1)和10 mL硫酸(4.2.3),緩緩.倒人80mL水中,冷卻后小心混勻。
硝酸溶液（1+9）:量取50 mL硝酸,緩緩倒入450 mL水中,混勻。
氫氧化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0g氫氧化鉀,溶于水中,稀釋至1 000 mL,混勻。
硼氫化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0 g硼氫化鉀,溶于5.0 g/L的氫氧化鉀溶液中,并稀釋至1000mL,混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
汞、砷標準儲備溶液:按GB/T602--2002中規(guī)定進行配制,或者選用國家標準物質一汞標準溶液(GBW 08617),此溶液每毫升相當于1000ug汞。
汞標準工作溶液:吸取汞標準儲備液1 mL于100 mL容量瓶中,用硝酸（1+9）溶液稀釋至刻度,混勻,此溶液濃度為10 ug/mL.再分別吸取10 ug/mL汞標準溶液1 mL和5 mL于兩個100 mL容量瓶中，用硝酸（1+9）溶液稀釋于刻度,混勻,溶液濃度分別為100 ng/mL和500 ng/mL,分別用于測定低濃度試樣和高濃度試樣,制作標準曲線,現(xiàn)用現(xiàn)配。
砷標準工作溶液(100ng/mL):準確移取10mL,砷標準中間溶液(1ｕg/mL)于100mL容量瓶中，加入1m鹽酸溶液(1+1),用水稀釋、定容,混勻,有效期為1周。
分析步驟
微波消解法
稱取0.20g~1.0g試樣,精確到0.0001 g,置于消解罐中加人2 mL~10 mL硝酸，2mL~4mL過氧化氫,蓋好安全閥后,將消解罐放人微波爐消解系統(tǒng)中，根據(jù)不同種類的試樣設置微波爐消解系統(tǒng)的最佳分析條件(見表1和表2),至消解完全,冷卻后用硝酸溶液洗滌消解罐并定容至50 mL容量瓶中(低含量試樣可定容至25 mL容量瓶)混勻待測。同時做試劑空白試驗。
標準系列配制
低濃度標準系列:分別吸取100ng/mL汞標準使用液0. 50mL、1. 00mL、2. 00 mL、4. 00 mL、5. 00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度1.0 ng/mL.2.0 ng/mL.4. 0 ng/mL.8. 0 ng/mL.10. 0 ng/mL.此標準系列適用于-般試樣測定。
高濃度標準系列:分別吸取500ng/mL汞標準使用液0. 50 mL、1. 00 mL.2. 00 mL、3. 00 mL.4.00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度5. 0 ng/ mL、10.0 ng/mL.20. 0 ng/mL.30. 0 ng/ mL.40.0 ng/mL.此標準系列適用于魚粉及含汞量偏高的試樣測定。
分別準確移取適量體積的砷標準工作溶液于50ml容量瓶中,補水至約40ml,加人2.5 ml 鹽酸,混勻。緩慢加入5mL,硫脲-抗壞血酸溶液,加水定容,混勻,配制成濃度分別為0ng/ml、0.50ng/ml、1.00ng/ml、4.00ng/ml、8.00ng/ml、16.00 ng/ml,的砷標準系列溶液。
儀器參考條件
光電倍增管負高壓:260V;汞空心陰極燈電流:30mA;原子化器:溫度300C,高度8.0mm;氬氣流速:載氣500mL/min,屏蔽氣1000mL/min;測量方式:標準曲線法;讀數(shù)方式:峰面積;讀數(shù)延遲時間:1.0 s;讀數(shù)時間:10.0 s;硼氫化鉀溶液加液時間:8.0 s;標準或樣液加液體積:2 mL。儀器穩(wěn)定后，測標準系列，至標準曲線的相關系數(shù)r>0.999后測試樣。
濃度測定方式:設定好儀 器最佳條件,逐步將爐溫升至所需溫度后,穩(wěn)定10 min~20 min后開始測量。連續(xù)用硝酸溶液進樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉入標準系列測量,繪制標準曲線。轉入試樣測量,先用硝酸溶液進樣,使讀數(shù)基本回零,再分別測定試樣空白和試樣消化液,每測不同的試樣前都應清洗進樣器。
儀器自動計算結果方式:設定好儀器最佳條件,在試樣參數(shù)畫面輸入以下參數(shù):試樣質量(g),稀釋體積(mL),并選擇結果的濃度單位,逐步將爐溫升至所需溫度,穩(wěn)定后測量。連續(xù)用硝酸溶液
進樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉人標準系列測量,繪制標準曲線。在轉入試樣測定之前,再進人空白值測量狀態(tài),用試樣空白消化液進樣,讓儀器取其均值作為扣底的空白值。隨后即可依法測定試樣。測定完畢后,選擇“打印報告”即可將測定結果自動打印。
計算
式中:
ω試樣中汞/砷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg); .
C-試樣消化液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
C0-試劑空白液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
V--試樣消化液總體積,單位為毫升(mL);
m-試樣質量,單位為克(g)。
測定結果以平行測定的算術平均值表示，保留兩位有效數(shù)值；
精密度
在重復性條件下，獲得的兩次獨立測量結果與算術平均值的絕對差值與該算術平均值的比值及相對偏差r應符合下表要求；
第二部分：飼料中總磷的測定 分光光度法
1.范圍 本標準規(guī)定了用鉬黃分光光度法測定飼料中總磷量的方法。
本標準適用于飼料原料(除磷酸鹽外)及飼料產品中磷的測定。
2、引用標準
下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。
GB/T6437-2002
3.原理 將試樣中的有機物破壞，使磷元素游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的 [(NH4)3P04NH4VO3 ·16MoO3〕絡合物，在波長400 nm下進行比色測定。
4.試劑 實驗室用水應符合 GB/T 6682中三級水的規(guī)格，本標準中所用試劑，除特殊說明外，均為分析純。
4.1， 鹽酸溶液:1+1
4.2 硝酸。
4. 3 高氯酸。
4.4 釩鉬酸銨顯色劑:稱取偏釩酸銨 1. 25 g，加水 200 mL加熱溶解，冷卻后再加入 250 ml硝酸 (4.3)，另稱取鉬酸銨25 g，加水400 mL加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容至 1 000 ml，避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用。
4.5 磷標準液:將磷酸二氫鉀在 105攝氏度干燥 1h，在干操器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉入1 000 ml容量瓶中，加硝酸 3 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50 ug/mL的磷標準液.
5、儀器和設備
5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。5.2 分樣篩:孔徑0.42 mm(40目)。 5. 3 分析天平:感量0. 0001 g, 5.4 V-1500型分光光度計:可在 400 nm下測定吸光度。5. 5 比色皿:1 cm 5.6 高溫爐:可控溫度在(55。士20)'C. 5.7 瓷坩堝:50 ml,.5.8 容量瓶:50.100,1000 ml
5.9 移液管:1.0,2. 0,5.0,10.0 ml. 5.10 三角瓶:250 ml。 5.11 凱氏燒瓶:125,250 ml。 5.12 可調溫電爐:1000W
6.試樣制備
取有代表性試樣2 kg，用四分法將試樣縮分至250 g，粉碎過0.42 mm孔篩，裝入樣品瓶中，密封保存?zhèn)溆谩?br />
7、測定步驟
7.1 試樣的分解
7.1.1 干法{不適用于含磷酸氫鈣[Ca(H2PO4)2]的飼料} 稱取試樣 2 g-5 g(精確至。.0002g)于柑渦中，在電爐上小心炭化，再放人高溫爐，在 550 C灼燒 3 h(或測粗灰分后繼續(xù)進行)，取出冷卻，加人 10 mL鹽酸(4-1)和硝酸(4.2)數(shù)滴，小心煮沸約10 min, 冷卻后轉入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.2 濕法
稱取試樣 0.5 g-5 g(精確至0. 000 2 g)于凱氏燒瓶中，加人硝酸(4.2)30 mL，小心加熱煮沸至黃 煙逸盡，稍冷，加人高氯酸(4.3)10 m工，繼續(xù)加熱至高氯酸冒白煙(不得蒸干)，溶液基本無色，冷卻，加 水 30 ml，加熱煮沸，冷卻后，用水轉入 100 mL容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.3 鹽酸溶解法(適用于微量元素預混料) 稱取試樣。.2g^1 g(精確0.0002g)于100 mL燒杯中，緩緩加入鹽酸(4. 1)10 mL，使其全部溶解，冷卻后轉入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.2 工作曲線的繪制 準確移取磷標準液(4. 5)0.0,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 ml于 50 mL容量瓶中，各加釩鉬氨酸顯色劑(4. 4) 10 ml ，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，以0.0 mL溶液為參比，用 1 cm比色 皿，在 400 nm波長下用分光光度計測各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制工作曲線.
7.3 試樣的測定 準確移取試樣分解液 1. 0 mL-10. 0 mL(含磷量50ug-750 ug)于50 mL容量瓶中，加人釩鑰酸 錢顯色劑(4.4)10 mL，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，用 1 cm 比色皿在 400 nm波長下測定試樣分解液的吸光度 ，在工作曲線上查得試樣分解液的磷含量。
8 測定結果的計算及表述
8.1 結果計算
測定結果按式(1)計算：
x一 以質量分數(shù)表示的磷含量%;
m1 一 由工作曲線查得試樣分解液磷含量ug;
V- 試樣分解液的總體積ML;
m一 試樣的質量g;
V1 一試樣測定時移取試樣分解液體積mL
8.2 結果表示
每個試樣稱取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為測定結果，所得到的結果應表示至小數(shù)點后兩位
9 允許差
含磷量 0.5%以下.允許相對偏差 10%;含磷量 0.5%以上，允許相對偏差 3%.
第三部分：飼料中鎘、鉛的測定
1.范圍
本文件描述了飼料中鎘測定的火焰原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法。
本文件適用于配合飼料,濃縮飼料、精料補充料、添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料中鎘的測定。
本文件中當取樣量5g,定容體積為50ml,時,火焰原子吸收光譜法的鎘檢出限為0.08mg/kg,定量限為0.20mg/kg。
當取樣量5g,定容體積為50mL時,火焰原子吸收光譜法的鉛定量限為2mg/kg;當取樣量1g,定容體積為10ml,時。
定量限為0.05mg/kg。
2.原理
鎘：試樣經干灰化或濕消解(微波消解)、或鹽酸溶解后,導人原子吸收分光光度計的火焰原子化器中,在波長228.8nm處測定吸光度值,在一定的濃度范圍內,鎘濃度與其吸光度值成正比,標準曲線校準定量。
鉛：試樣經干灰化、酸溶或濕消化后,使鉛溶出,用原子吸收光譜儀在283.3nm處測定吸光度值,并與標準曲線進行比較定量。
3.試劑或材料
警告:使用各種強酸時應在通風櫥中進行:使用高氯酸消解時注意不要燒干,防止爆炸除非另有規(guī)定,僅使用分析純試劑。
水:GB/T6682,一級。
硝酸:優(yōu)級純。
鹽酸:優(yōu)級純
高氯酸:優(yōu)級純。
硝酸溶液(6mol/L)。
硝酸鈀溶液(2mg/ml)。
磷酸二氫銨溶液(10mg/ml)。
鎘標準儲備溶液(1mg/ml)。
鎘標準中間溶液(10μg/mL)。
鎘標準中間溶液Ⅱ(100μg/L)，臨用現(xiàn)配。
鎘標準系列溶液:準確移取適量體積的鎘標準中間溶液I(5.11)分別置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀釋至刻度,混勻,配制成濃度分別為0μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/ml、0.08μg/mL、0.10μg/ml的標準系列溶液。臨用現(xiàn)配。
鎘標準系列溶液Ⅱ:準確移取適量體積的鎘標準中間溶液Ⅱ(5.12)分別置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀釋至刻度,混勻,配制成濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、3.0μg/L、4.0μg/L、的標準系列溶液。臨用現(xiàn)配。
鉛標準儲備溶液(1.0mg/mL)。
鉛標準中間溶液(10.0μg/mL)。
鉛標準工作溶液(100ng/ml)。
乙炔:應符合GB6819-2004中3.1的要求
中速濾紙。
4.儀器設備
原子吸收分光光度計（AA1800F）火焰原子化器和鎘空心陰極燈。
分析天平:感量0.0001g和0.01g。
馬福爐:溫度能保持在500℃±15℃。
瓷坩堝:60cm”,內壁光滑,沒有被腐蝕,無刮痕。
消解管。
可調式電熱板或可調式電爐:溫度范圍100℃~400℃,精度±5℃。
微波消解儀:帶聚四氟乙烯消解罐。
注:所用的坩堝、消化內罐、玻璃器皿容器先用含清潔劑的熱水超聲清洗干凈后,用水沖洗、晾干,再用硝酸溶液(5.7)浸泡2h.用水沖洗干凈,晾干后使用。
5.樣品
鎘：按GB/T20195制備樣品,至少200g,粉碎使其全部通過0,425mm孔徑的分析篩,裝人密閉容器中,備用。飼料添加劑樣品的粒度按照相應產品標準規(guī)定執(zhí)行。
鉛：依照 GB/T 14699.1進行飼料采樣,并按GB/T 20195制備試樣,粉碎,過1mm尼龍篩,混勻裝入密閉容器中,備用。
6.實驗步驟
6.1試樣溶液制備
6.1.1干灰化法
適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料以及含有機物的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料。
平行做兩份試驗。稱取試樣5g(精確至0.01g)于瓷坩中,放置于可調式電熱板或可調式電爐上緩慢加熱炭化至無煙后,轉入500℃馬福爐中灰化5h,直至試樣呈白色或灰白色、無碳粒為止。如發(fā)現(xiàn)有少量碳粒時,可滴人硝酸溶液(5.7)使殘渣潤濕,將瓷坩堝移至可調式電熱板或可調式電爐上小火干燥,再移至馬福爐中繼續(xù)灰化至試樣呈白色或灰白色,無碳粒。
取出坩堝,冷卻至室溫。吸取5ml鹽酸溶液(5.5),逐滴加入到瓷坩堝中,邊加邊轉動,直到溶液無氣泡溢出,然后加入剩余鹽酸溶液,再加5ml硝酸溶液(5.7),將瓷坩堝移至可調式電熱板或可調式電爐上,緩慢加熱直到消化液至2ml~3mL(注意防止濺出)時,取下,冷卻至室溫。將消化液轉移到50ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗瓷坩堝壁,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.2濕消解法
適用于含有機物較多的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料平行做兩份試驗。稱取試樣1g(精確至0.0001g)于消解管中,加少量水潤濕,加人10ml,硝酸(5.2),置于通風櫥,靜置2h后,加人5ml,高氯酸(5.4),在溫度低于250℃的可調式電熱板或可調式電爐上小火加熱消化,待消化液冒白煙為止,取下,冷卻。將消化液轉移至50ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗消解管,并人容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.3 微波消解法
適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料以及含有機物的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料。
平行做兩份試驗。稱取 0.3g~0.5g試樣(精確至0.0001g)于消解中,加人6ml,硝酸(5.2),旋緊罐蓋,放置2h或靜置過夜,旋緊罐蓋,蓋好安全閥,將消解罐放人微波消解儀中,按照表1和微波消解儀的操作步驟與程序進行消解。消解結束后,取出,冷卻至室溫。如果試樣消解液中殘酸量過大,將其置于可調式電熱板或可調式電爐上加熱趕酸,至體積1ml~2mL時,取下,冷卻。將消化液轉移至10ml,或 25ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗消解罐,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.4鹽酸溶解法
適用于礦物質飼料原料和礦物元素飼料添加劑。
平行做兩份試驗。稱取試樣0.5g~2g(精確至0.0001g)于150ml錐形瓶中,加2ml水將試樣潤濕,取10mL鹽酸溶液,逐滴加入到錐形瓶中,邊加邊轉動,直到溶液無氣泡溢出,然后將剩余鹽酸溶液全部加人,再加入5ml硝酸溶液,將錐形瓶移至可調式電熱板或可調式電爐小火加熱消化至2ml~3mL(注意防止濺出),取下,冷卻。將溶液轉移至25mL或50mL容量瓶中,用少許水多次沖洗錐形瓶,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.2原子吸收光譜測定參考條件
根據(jù)各自儀器性能調至最佳狀態(tài),火焰原子吸收光譜法儀器參考條件見表2。
6.3測定
6.3.1 火焰原子吸收光譜法
將儀器設置為扣背景模式,并調至最佳工作狀態(tài),用水或曲線零點調零,在元素特征波長228.8nm處,依次測定空白溶液、鎘標準系列溶液I(5.13)和試樣溶液的吸光度值,以鎘標準系列溶液1(5.13)的鎘濃度為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線,標準曲線相關系數(shù)r≥0.999。試樣溶液的吸光度值應在標準曲線線性范圍內,若超出,可參照鎘標準系列溶液1(5.13)的酸濃度進行適度稀釋(n倍)后測定。
7.實驗數(shù)據(jù)處理
原理
動物源性食品是食品行業(yè)的中的重要組成，在其生產過程中，過量的有毒有害物質，特別是重金屬元素通過所飼養(yǎng)的動物排泄到土壤或水域中，對人類的生存環(huán)境構成威脅。為維護我國動物源性食品安全，農業(yè)農村部下達第194號文件，決定加強飼料商品管理。其中重金屬元素汞毒性強，是飼料樣品中重要的檢測指標。
試樣經酸加熱消解后。在酸性介質中,試樣中汞被硼氫化鉀(KBH.)或硼氫化鈉(NaBH,)還原成原子態(tài)汞,由載氣(氬氣帶人原子化器中，在特制汞空心陰極燈照射下，基態(tài)汞原子被激發(fā)至高能態(tài),在去活化回到基態(tài)時,發(fā)射出特征波長的黃光,其熒光強度與汞含量成正比，與標準系列比較定量。
標準依據(jù)GB/T 13081-2022；GB/T 13079-2022
儀器及試劑
AFS-680原子熒光光度計。
汞空心陰極燈；
砷空心陰極燈；
微波消解爐；
實驗室用樣品粉碎機或研缽。
硝酸( 優(yōu)級純)。
30%過氧化氫。
硫酸(優(yōu)級純)。
混合酸液硫酸 +硝酸+水(1+1+8):量取10 mL硝酸(4:2.1)和10 mL硫酸(4.2.3),緩緩.倒人80mL水中,冷卻后小心混勻。
硝酸溶液（1+9）:量取50 mL硝酸,緩緩倒入450 mL水中,混勻。
氫氧化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0g氫氧化鉀,溶于水中,稀釋至1 000 mL,混勻。
硼氫化鉀溶液(5 g/L):稱取5.0 g硼氫化鉀,溶于5.0 g/L的氫氧化鉀溶液中,并稀釋至1000mL,混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
汞、砷標準儲備溶液:按GB/T602--2002中規(guī)定進行配制,或者選用國家標準物質一汞標準溶液(GBW 08617),此溶液每毫升相當于1000ug汞。
汞標準工作溶液:吸取汞標準儲備液1 mL于100 mL容量瓶中,用硝酸（1+9）溶液稀釋至刻度,混勻,此溶液濃度為10 ug/mL.再分別吸取10 ug/mL汞標準溶液1 mL和5 mL于兩個100 mL容量瓶中，用硝酸（1+9）溶液稀釋于刻度,混勻,溶液濃度分別為100 ng/mL和500 ng/mL,分別用于測定低濃度試樣和高濃度試樣,制作標準曲線,現(xiàn)用現(xiàn)配。
砷標準工作溶液(100ng/mL):準確移取10mL,砷標準中間溶液(1ｕg/mL)于100mL容量瓶中，加入1m鹽酸溶液(1+1),用水稀釋、定容,混勻,有效期為1周。
分析步驟
微波消解法
稱取0.20g~1.0g試樣,精確到0.0001 g,置于消解罐中加人2 mL~10 mL硝酸，2mL~4mL過氧化氫,蓋好安全閥后,將消解罐放人微波爐消解系統(tǒng)中，根據(jù)不同種類的試樣設置微波爐消解系統(tǒng)的最佳分析條件(見表1和表2),至消解完全,冷卻后用硝酸溶液洗滌消解罐并定容至50 mL容量瓶中(低含量試樣可定容至25 mL容量瓶)混勻待測。同時做試劑空白試驗。
標準系列配制
低濃度標準系列:分別吸取100ng/mL汞標準使用液0. 50mL、1. 00mL、2. 00 mL、4. 00 mL、5. 00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度1.0 ng/mL.2.0 ng/mL.4. 0 ng/mL.8. 0 ng/mL.10. 0 ng/mL.此標準系列適用于-般試樣測定。
高濃度標準系列:分別吸取500ng/mL汞標準使用液0. 50 mL、1. 00 mL.2. 00 mL、3. 00 mL.4.00 mL于50 mL容量瓶中,用硝酸溶液稀釋至刻度,混勻。各自相當于汞濃度5. 0 ng/ mL、10.0 ng/mL.20. 0 ng/mL.30. 0 ng/ mL.40.0 ng/mL.此標準系列適用于魚粉及含汞量偏高的試樣測定。
分別準確移取適量體積的砷標準工作溶液于50ml容量瓶中,補水至約40ml,加人2.5 ml 鹽酸,混勻。緩慢加入5mL,硫脲-抗壞血酸溶液,加水定容,混勻,配制成濃度分別為0ng/ml、0.50ng/ml、1.00ng/ml、4.00ng/ml、8.00ng/ml、16.00 ng/ml,的砷標準系列溶液。
儀器參考條件
光電倍增管負高壓:260V;汞空心陰極燈電流:30mA;原子化器:溫度300C,高度8.0mm;氬氣流速:載氣500mL/min,屏蔽氣1000mL/min;測量方式:標準曲線法;讀數(shù)方式:峰面積;讀數(shù)延遲時間:1.0 s;讀數(shù)時間:10.0 s;硼氫化鉀溶液加液時間:8.0 s;標準或樣液加液體積:2 mL。儀器穩(wěn)定后，測標準系列，至標準曲線的相關系數(shù)r>0.999后測試樣。
濃度測定方式:設定好儀 器最佳條件,逐步將爐溫升至所需溫度后,穩(wěn)定10 min~20 min后開始測量。連續(xù)用硝酸溶液進樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉入標準系列測量,繪制標準曲線。轉入試樣測量,先用硝酸溶液進樣,使讀數(shù)基本回零,再分別測定試樣空白和試樣消化液,每測不同的試樣前都應清洗進樣器。
儀器自動計算結果方式:設定好儀器最佳條件,在試樣參數(shù)畫面輸入以下參數(shù):試樣質量(g),稀釋體積(mL),并選擇結果的濃度單位,逐步將爐溫升至所需溫度,穩(wěn)定后測量。連續(xù)用硝酸溶液
進樣,待讀數(shù)穩(wěn)定之后,轉人標準系列測量,繪制標準曲線。在轉入試樣測定之前,再進人空白值測量狀態(tài),用試樣空白消化液進樣,讓儀器取其均值作為扣底的空白值。隨后即可依法測定試樣。測定完畢后,選擇“打印報告”即可將測定結果自動打印。
計算
式中:
ω試樣中汞/砷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg); .
C-試樣消化液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
C0-試劑空白液中汞的含量,單位為納克每毫升(ng/mL);
V--試樣消化液總體積,單位為毫升(mL);
m-試樣質量,單位為克(g)。
測定結果以平行測定的算術平均值表示，保留兩位有效數(shù)值；
精密度
在重復性條件下，獲得的兩次獨立測量結果與算術平均值的絕對差值與該算術平均值的比值及相對偏差r應符合下表要求；
| 測定結果/(mg/kg) | 相對偏差（r）% |
| ≤0.020 | ≤100 |
| 0.020-0.100 | ≤50 |
| ≥0.100 | ≤20 |
第二部分：飼料中總磷的測定 分光光度法
1.范圍 本標準規(guī)定了用鉬黃分光光度法測定飼料中總磷量的方法。
本標準適用于飼料原料(除磷酸鹽外)及飼料產品中磷的測定。
2、引用標準
下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。
GB/T6437-2002
3.原理 將試樣中的有機物破壞，使磷元素游離出來，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理，生成黃色的 [(NH4)3P04NH4VO3 ·16MoO3〕絡合物，在波長400 nm下進行比色測定。
4.試劑 實驗室用水應符合 GB/T 6682中三級水的規(guī)格，本標準中所用試劑，除特殊說明外，均為分析純。
4.1， 鹽酸溶液:1+1
4.2 硝酸。
4. 3 高氯酸。
4.4 釩鉬酸銨顯色劑:稱取偏釩酸銨 1. 25 g，加水 200 mL加熱溶解，冷卻后再加入 250 ml硝酸 (4.3)，另稱取鉬酸銨25 g，加水400 mL加熱溶解，在冷卻的條件下，將兩種溶液混合，用水定容至 1 000 ml，避光保存，若生成沉淀，則不能繼續(xù)使用。
4.5 磷標準液:將磷酸二氫鉀在 105攝氏度干燥 1h，在干操器中冷卻后稱取0.2195g溶解于水，定量轉入1 000 ml容量瓶中，加硝酸 3 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，即為50 ug/mL的磷標準液.
5、儀器和設備
5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽。5.2 分樣篩:孔徑0.42 mm(40目)。 5. 3 分析天平:感量0. 0001 g, 5.4 V-1500型分光光度計:可在 400 nm下測定吸光度。5. 5 比色皿:1 cm 5.6 高溫爐:可控溫度在(55。士20)'C. 5.7 瓷坩堝:50 ml,.5.8 容量瓶:50.100,1000 ml
5.9 移液管:1.0,2. 0,5.0,10.0 ml. 5.10 三角瓶:250 ml。 5.11 凱氏燒瓶:125,250 ml。 5.12 可調溫電爐:1000W
6.試樣制備
取有代表性試樣2 kg，用四分法將試樣縮分至250 g，粉碎過0.42 mm孔篩，裝入樣品瓶中，密封保存?zhèn)溆谩?br />
7、測定步驟
7.1 試樣的分解
7.1.1 干法{不適用于含磷酸氫鈣[Ca(H2PO4)2]的飼料} 稱取試樣 2 g-5 g(精確至。.0002g)于柑渦中，在電爐上小心炭化，再放人高溫爐，在 550 C灼燒 3 h(或測粗灰分后繼續(xù)進行)，取出冷卻，加人 10 mL鹽酸(4-1)和硝酸(4.2)數(shù)滴，小心煮沸約10 min, 冷卻后轉入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.2 濕法
稱取試樣 0.5 g-5 g(精確至0. 000 2 g)于凱氏燒瓶中，加人硝酸(4.2)30 mL，小心加熱煮沸至黃 煙逸盡，稍冷，加人高氯酸(4.3)10 m工，繼續(xù)加熱至高氯酸冒白煙(不得蒸干)，溶液基本無色，冷卻，加 水 30 ml，加熱煮沸，冷卻后，用水轉入 100 mL容量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.1.3 鹽酸溶解法(適用于微量元素預混料) 稱取試樣。.2g^1 g(精確0.0002g)于100 mL燒杯中，緩緩加入鹽酸(4. 1)10 mL，使其全部溶解，冷卻后轉入 100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。
7.2 工作曲線的繪制 準確移取磷標準液(4. 5)0.0,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 ml于 50 mL容量瓶中，各加釩鉬氨酸顯色劑(4. 4) 10 ml ，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，以0.0 mL溶液為參比，用 1 cm比色 皿，在 400 nm波長下用分光光度計測各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制工作曲線.
7.3 試樣的測定 準確移取試樣分解液 1. 0 mL-10. 0 mL(含磷量50ug-750 ug)于50 mL容量瓶中，加人釩鑰酸 錢顯色劑(4.4)10 mL，用水稀釋到刻度，搖勻，常溫下放置 10 min以上，用 1 cm 比色皿在 400 nm波長下測定試樣分解液的吸光度 ，在工作曲線上查得試樣分解液的磷含量。
8 測定結果的計算及表述
8.1 結果計算
測定結果按式(1)計算：
x一 以質量分數(shù)表示的磷含量%;
m1 一 由工作曲線查得試樣分解液磷含量ug;
V- 試樣分解液的總體積ML;
m一 試樣的質量g;
V1 一試樣測定時移取試樣分解液體積mL
8.2 結果表示
每個試樣稱取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為測定結果，所得到的結果應表示至小數(shù)點后兩位
9 允許差
含磷量 0.5%以下.允許相對偏差 10%;含磷量 0.5%以上，允許相對偏差 3%.
第三部分：飼料中鎘、鉛的測定
1.范圍
本文件描述了飼料中鎘測定的火焰原子吸收光譜法和石墨爐原子吸收光譜法。
本文件適用于配合飼料,濃縮飼料、精料補充料、添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料中鎘的測定。
本文件中當取樣量5g,定容體積為50ml,時,火焰原子吸收光譜法的鎘檢出限為0.08mg/kg,定量限為0.20mg/kg。
當取樣量5g,定容體積為50mL時,火焰原子吸收光譜法的鉛定量限為2mg/kg;當取樣量1g,定容體積為10ml,時。
定量限為0.05mg/kg。
2.原理
鎘：試樣經干灰化或濕消解(微波消解)、或鹽酸溶解后,導人原子吸收分光光度計的火焰原子化器中,在波長228.8nm處測定吸光度值,在一定的濃度范圍內,鎘濃度與其吸光度值成正比,標準曲線校準定量。
鉛：試樣經干灰化、酸溶或濕消化后,使鉛溶出,用原子吸收光譜儀在283.3nm處測定吸光度值,并與標準曲線進行比較定量。
3.試劑或材料
警告:使用各種強酸時應在通風櫥中進行:使用高氯酸消解時注意不要燒干,防止爆炸除非另有規(guī)定,僅使用分析純試劑。
水:GB/T6682,一級。
硝酸:優(yōu)級純。
鹽酸:優(yōu)級純
高氯酸:優(yōu)級純。
硝酸溶液(6mol/L)。
硝酸鈀溶液(2mg/ml)。
磷酸二氫銨溶液(10mg/ml)。
鎘標準儲備溶液(1mg/ml)。
鎘標準中間溶液(10μg/mL)。
鎘標準中間溶液Ⅱ(100μg/L)，臨用現(xiàn)配。
鎘標準系列溶液:準確移取適量體積的鎘標準中間溶液I(5.11)分別置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀釋至刻度,混勻,配制成濃度分別為0μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/ml、0.08μg/mL、0.10μg/ml的標準系列溶液。臨用現(xiàn)配。
鎘標準系列溶液Ⅱ:準確移取適量體積的鎘標準中間溶液Ⅱ(5.12)分別置于50mL容量瓶中,用硝酸溶液(5.6)稀釋至刻度,混勻,配制成濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、3.0μg/L、4.0μg/L、的標準系列溶液。臨用現(xiàn)配。
鉛標準儲備溶液(1.0mg/mL)。
鉛標準中間溶液(10.0μg/mL)。
鉛標準工作溶液(100ng/ml)。
乙炔:應符合GB6819-2004中3.1的要求
中速濾紙。
4.儀器設備
原子吸收分光光度計（AA1800F）火焰原子化器和鎘空心陰極燈。
分析天平:感量0.0001g和0.01g。
馬福爐:溫度能保持在500℃±15℃。
瓷坩堝:60cm”,內壁光滑,沒有被腐蝕,無刮痕。
消解管。
可調式電熱板或可調式電爐:溫度范圍100℃~400℃,精度±5℃。
微波消解儀:帶聚四氟乙烯消解罐。
注:所用的坩堝、消化內罐、玻璃器皿容器先用含清潔劑的熱水超聲清洗干凈后,用水沖洗、晾干,再用硝酸溶液(5.7)浸泡2h.用水沖洗干凈,晾干后使用。
5.樣品
鎘：按GB/T20195制備樣品,至少200g,粉碎使其全部通過0,425mm孔徑的分析篩,裝人密閉容器中,備用。飼料添加劑樣品的粒度按照相應產品標準規(guī)定執(zhí)行。
鉛：依照 GB/T 14699.1進行飼料采樣,并按GB/T 20195制備試樣,粉碎,過1mm尼龍篩,混勻裝入密閉容器中,備用。
6.實驗步驟
6.1試樣溶液制備
6.1.1干灰化法
適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料以及含有機物的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料。
平行做兩份試驗。稱取試樣5g(精確至0.01g)于瓷坩中,放置于可調式電熱板或可調式電爐上緩慢加熱炭化至無煙后,轉入500℃馬福爐中灰化5h,直至試樣呈白色或灰白色、無碳粒為止。如發(fā)現(xiàn)有少量碳粒時,可滴人硝酸溶液(5.7)使殘渣潤濕,將瓷坩堝移至可調式電熱板或可調式電爐上小火干燥,再移至馬福爐中繼續(xù)灰化至試樣呈白色或灰白色,無碳粒。
取出坩堝,冷卻至室溫。吸取5ml鹽酸溶液(5.5),逐滴加入到瓷坩堝中,邊加邊轉動,直到溶液無氣泡溢出,然后加入剩余鹽酸溶液,再加5ml硝酸溶液(5.7),將瓷坩堝移至可調式電熱板或可調式電爐上,緩慢加熱直到消化液至2ml~3mL(注意防止濺出)時,取下,冷卻至室溫。將消化液轉移到50ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗瓷坩堝壁,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.2濕消解法
適用于含有機物較多的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料平行做兩份試驗。稱取試樣1g(精確至0.0001g)于消解管中,加少量水潤濕,加人10ml,硝酸(5.2),置于通風櫥,靜置2h后,加人5ml,高氯酸(5.4),在溫度低于250℃的可調式電熱板或可調式電爐上小火加熱消化,待消化液冒白煙為止,取下,冷卻。將消化液轉移至50ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗消解管,并人容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.3 微波消解法
適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料以及含有機物的添加劑預混合飼料、飼料添加劑和飼料原料。
平行做兩份試驗。稱取 0.3g~0.5g試樣(精確至0.0001g)于消解中,加人6ml,硝酸(5.2),旋緊罐蓋,放置2h或靜置過夜,旋緊罐蓋,蓋好安全閥,將消解罐放人微波消解儀中,按照表1和微波消解儀的操作步驟與程序進行消解。消解結束后,取出,冷卻至室溫。如果試樣消解液中殘酸量過大,將其置于可調式電熱板或可調式電爐上加熱趕酸,至體積1ml~2mL時,取下,冷卻。將消化液轉移至10ml,或 25ml,容量瓶中,用少許水多次沖洗消解罐,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.1.4鹽酸溶解法
適用于礦物質飼料原料和礦物元素飼料添加劑。
平行做兩份試驗。稱取試樣0.5g~2g(精確至0.0001g)于150ml錐形瓶中,加2ml水將試樣潤濕,取10mL鹽酸溶液,逐滴加入到錐形瓶中,邊加邊轉動,直到溶液無氣泡溢出,然后將剩余鹽酸溶液全部加人,再加入5ml硝酸溶液,將錐形瓶移至可調式電熱板或可調式電爐小火加熱消化至2ml~3mL(注意防止濺出),取下,冷卻。將溶液轉移至25mL或50mL容量瓶中,用少許水多次沖洗錐形瓶,并入容量瓶中,加水定容,搖勻,過濾,備用。同時做空白試驗。
6.2原子吸收光譜測定參考條件
根據(jù)各自儀器性能調至最佳狀態(tài),火焰原子吸收光譜法儀器參考條件見表2。
6.3測定
6.3.1 火焰原子吸收光譜法
將儀器設置為扣背景模式,并調至最佳工作狀態(tài),用水或曲線零點調零,在元素特征波長228.8nm處,依次測定空白溶液、鎘標準系列溶液I(5.13)和試樣溶液的吸光度值,以鎘標準系列溶液1(5.13)的鎘濃度為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線,標準曲線相關系數(shù)r≥0.999。試樣溶液的吸光度值應在標準曲線線性范圍內,若超出,可參照鎘標準系列溶液1(5.13)的酸濃度進行適度稀釋(n倍)后測定。
7.實驗數(shù)據(jù)處理
