WB實驗中內(nèi)參抗體選擇的原則及技巧
內(nèi)參抗體（Housekeeping Antibodies）是實驗中的“標(biāo)尺”，用于校正樣本量差異、評估實驗體系穩(wěn)定性（如Western Blot、免疫組化）。選擇合適的內(nèi)參抗體是確保數(shù)據(jù)可靠性的關(guān)鍵一步，尤其對高校科研中基因表達(dá)、蛋白定量等研究至關(guān)重要。
01 樣本種屬與組織類型
哺乳動物：β-actin、GAPDH、β-tubulin 是百搭選手，適用全細(xì)胞 / 胞漿檢測。
植物樣本：Plant actin 或 Rubisco 更靠譜，避免跨物種干擾。
特殊物種：如酵母、昆蟲，建議查文獻(xiàn)選保守管家基因（如 Histone H3）。
02 分子量差異
黃金法則：目的蛋白與內(nèi)參分子量差＞5kDa，避免條帶重疊。例：目的蛋白 45kDa，別選 β-actin（42kDa），換 GAPDH（36kDa）或 β-tubulin（50kDa）。
進(jìn)階技巧：用預(yù)染 Marker 定位，轉(zhuǎn)膜后剪膜分區(qū)域檢測，省時省力。若目的蛋白與內(nèi)參分子量分子量接近，可選用4-20%梯度膠，提高分辨率。
03 亞細(xì)胞定位
04 實驗條件
代謝研究：缺氧、糖尿病模型慎用 GAPDH（其表達(dá)受糖酵解影響）。
細(xì)胞增殖：c-Jun 表達(dá)波動大，換用 PCNA 更穩(wěn)定。
凋亡實驗：Lamin、TBP 易降解，優(yōu)先選 Histone H3。
單克隆 vs 多克隆
單抗：特異性強，適合跨物種檢測。
多抗：親和力高但可能有非特異結(jié)合，適合保守蛋白。
標(biāo)記類型
直接檢測：選 HRP 或熒光標(biāo)記抗體。
分步檢測：用未標(biāo)記抗體 + 二抗，適合多重檢測（需注意宿主種屬匹配）。
02 實驗條件優(yōu)化
條帶異常
信號弱：提高抗體濃度（如從 1:1000 增至 1:500）或延長曝光時間。
雜帶多：降低抗體濃度或改用單抗。
省時技巧
分膜檢測：轉(zhuǎn)膜后按分子量剪膜，同時孵育目的蛋白和內(nèi)參抗體。
一抗復(fù)用：用 Strip 緩沖液洗膜后，重新孵育另一抗體（如先測目的蛋白，再測內(nèi)參）。
A：可能是上樣量不均或轉(zhuǎn)膜效率差異。建議：用 BCA 法精確定量，上樣前充分渦旋混勻。轉(zhuǎn)膜時用預(yù)染 Marker 監(jiān)控，確保膜與膠緊密貼合。
Q2：如何避免抗體交叉反應(yīng)？
A：選擇不同宿主來源的抗體（如兔抗目的蛋白 + 鼠抗內(nèi)參），并用對應(yīng)二抗檢測。
Q3: PTM研究如何選內(nèi)參？
A：檢測磷酸化蛋白時，用未修飾的總蛋白（如 p38 總抗體）作為內(nèi)參，而非通用內(nèi)參。
“精準(zhǔn)實驗，從選對抗體開始！”
內(nèi)參抗體 = 物種匹配 + 分子量差＞5kDa + 亞細(xì)胞定位一致 + 實驗條件適配
無論是初入實驗室的科研新人，還是追求極致精準(zhǔn)的資深學(xué)者，選擇經(jīng)過嚴(yán)格驗證的內(nèi)參抗體，都是實驗成功的基石。
萬生昊天內(nèi)參抗體，專為高校科研場景優(yōu)化：
高特異性：嚴(yán)格驗證，目標(biāo)條帶清晰無雜帶。
廣適用性：覆蓋多種樣本（人類、小鼠、大鼠等）及實驗需求（WB、IF、IP等）。
嚴(yán)格質(zhì)控：批間一致性高，穩(wěn)定性優(yōu)異，減少實驗變量。靈
活選擇：提供單克隆/多克隆抗體及不同宿主來源（兔、小鼠等），匹配不同實驗體系。
選錯內(nèi)參 = 實驗白做？
別慌！
這份指南帶你精準(zhǔn)避坑！
一、四大黃金原則
01 樣本種屬與組織類型
哺乳動物：β-actin、GAPDH、β-tubulin 是百搭選手，適用全細(xì)胞 / 胞漿檢測。
植物樣本：Plant actin 或 Rubisco 更靠譜，避免跨物種干擾。
特殊物種：如酵母、昆蟲，建議查文獻(xiàn)選保守管家基因（如 Histone H3）。
02 分子量差異
黃金法則：目的蛋白與內(nèi)參分子量差＞5kDa，避免條帶重疊。例：目的蛋白 45kDa，別選 β-actin（42kDa），換 GAPDH（36kDa）或 β-tubulin（50kDa）。
進(jìn)階技巧：用預(yù)染 Marker 定位，轉(zhuǎn)膜后剪膜分區(qū)域檢測，省時省力。若目的蛋白與內(nèi)參分子量分子量接近，可選用4-20%梯度膠，提高分辨率。
03 亞細(xì)胞定位
04 實驗條件
代謝研究：缺氧、糖尿病模型慎用 GAPDH（其表達(dá)受糖酵解影響）。
細(xì)胞增殖：c-Jun 表達(dá)波動大，換用 PCNA 更穩(wěn)定。
凋亡實驗：Lamin、TBP 易降解，優(yōu)先選 Histone H3。
二、實戰(zhàn)技巧
01 抗體類型與標(biāo)記選擇 單克隆 vs 多克隆
單抗：特異性強，適合跨物種檢測。
多抗：親和力高但可能有非特異結(jié)合，適合保守蛋白。
標(biāo)記類型
直接檢測：選 HRP 或熒光標(biāo)記抗體。
分步檢測：用未標(biāo)記抗體 + 二抗，適合多重檢測（需注意宿主種屬匹配）。
02 實驗條件優(yōu)化
條帶異常
信號弱：提高抗體濃度（如從 1:1000 增至 1:500）或延長曝光時間。
雜帶多：降低抗體濃度或改用單抗。
省時技巧
分膜檢測：轉(zhuǎn)膜后按分子量剪膜，同時孵育目的蛋白和內(nèi)參抗體。
一抗復(fù)用：用 Strip 緩沖液洗膜后，重新孵育另一抗體（如先測目的蛋白，再測內(nèi)參）。
三、常見問題Q&A
Q1: 為什么我的內(nèi)參條帶總是不齊？ A：可能是上樣量不均或轉(zhuǎn)膜效率差異。建議：用 BCA 法精確定量，上樣前充分渦旋混勻。轉(zhuǎn)膜時用預(yù)染 Marker 監(jiān)控，確保膜與膠緊密貼合。
Q2：如何避免抗體交叉反應(yīng)？
A：選擇不同宿主來源的抗體（如兔抗目的蛋白 + 鼠抗內(nèi)參），并用對應(yīng)二抗檢測。
Q3: PTM研究如何選內(nèi)參？
A：檢測磷酸化蛋白時，用未修飾的總蛋白（如 p38 總抗體）作為內(nèi)參，而非通用內(nèi)參。
“精準(zhǔn)實驗，從選對抗體開始！”
內(nèi)參抗體 = 物種匹配 + 分子量差＞5kDa + 亞細(xì)胞定位一致 + 實驗條件適配
無論是初入實驗室的科研新人，還是追求極致精準(zhǔn)的資深學(xué)者，選擇經(jīng)過嚴(yán)格驗證的內(nèi)參抗體，都是實驗成功的基石。
萬生昊天內(nèi)參抗體，專為高校科研場景優(yōu)化：
高特異性：嚴(yán)格驗證，目標(biāo)條帶清晰無雜帶。
廣適用性：覆蓋多種樣本（人類、小鼠、大鼠等）及實驗需求（WB、IF、IP等）。
嚴(yán)格質(zhì)控：批間一致性高，穩(wěn)定性優(yōu)異，減少實驗變量。靈
活選擇：提供單克隆/多克隆抗體及不同宿主來源（兔、小鼠等），匹配不同實驗體系。
- WB實驗中內(nèi)參抗體選擇的原則及技巧
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