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凝膠電泳遷移率實驗EMSA，ELSIA與生化指標檢測，核因子NF-Κb p65活性檢測，
PKC蛋白激酶活性檢測，明膠酶譜MMP活性檢測，蛋白印跡WB（Western blotting ）。
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| 服務商： 北京嘉美諾斯生物科技（北京）有限公司 | 查看該公司所有服務 >> |
步驟1. 目標基因全基因合成：
1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。如果我們的cDNA文庫中有這個基因，我們免費提供給客戶。
2. 根據(jù)選用的表達系統(tǒng)對cDNA進行密碼子優(yōu)化，密碼子優(yōu)化。
3. 合成設計好的基因序列。
步驟2. 目標基因亞克�。�
1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質(zhì)粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質(zhì)粒上。
3. 測序驗證構(gòu)建質(zhì)粒的準確性。
4. 提供如下表達載體：提供給客戶：正確構(gòu)建的重組表達質(zhì)粒，含重組質(zhì)粒的DH5α菌株及測序報告。
步驟3. E. coli表達菌株轉(zhuǎn)化及篩選：
1. 擴增并抽提構(gòu)建好的表達質(zhì)粒。
2. 將表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養(yǎng)基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養(yǎng)后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供給客戶：重組質(zhì)粒的表達菌株及表達檢測報告。
步驟4. 目標蛋白表達及純化：
1. 搖瓶培養(yǎng)1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構(gòu)建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
提供給客戶：純化好的目標蛋白1-5mg及純化報告。
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