動物細胞培養(yǎng)需要的實驗室設(shè)備和耗材介紹

用于動物細胞培養(yǎng)的實驗室設(shè)備和耗材有很多種，進行動物細胞培養(yǎng)所需的基本設(shè)備如下：

必備設(shè)備	有益設(shè)備	有用的附加設(shè)備
振蕩培養(yǎng)箱	生物安全柜	低溫冷凍柜
顯微鏡	細胞計數(shù)儀	玻璃器皿清洗機
滅菌器	真空泵	菌落柜臺
清洗儀器	二氧化碳培養(yǎng)箱	共聚焦顯微鏡
殺菌干燥箱	制備和質(zhì)量控制	熒光激活細胞分選儀
離心機	溫度記錄
純水機	細胞生物反應(yīng)器
液氮罐	移液器和自動移液器
水浴鍋

動物細胞培養(yǎng)實驗室所需基本設(shè)備清單：

• 無菌工作區(qū)/細胞培養(yǎng)罩（即層流罩或生物安全柜）
• 培養(yǎng)箱（推薦使用潮濕的二氧化碳培養(yǎng)箱）
• 水浴
• 離心機
• 冰箱和冰柜 (–20°C)
• 細胞計數(shù)器（例如自動細胞計數(shù)器或血細胞計數(shù)器）
• 倒置顯微鏡
• 液氮 (N 2 ) 冷凍箱或低溫儲存容器

1、滅菌器（即高壓滅菌器）
細胞培養(yǎng)所需的無菌工作區(qū)：
為了保持清潔的細胞培養(yǎng)工作，如果可能，有必要準備一個單獨的房間或空間。
這個房間應(yīng)該是密閉的，另外需要配備一個氣流柜，已提供潔凈的空氣，一些實驗室還會采用HEPA空氣過濾器。實驗室必須是為潔培養(yǎng)工作二設(shè)計，嚴格限制在細胞培養(yǎng)實驗室內(nèi)或附近培養(yǎng)原代動物組織和微生物。
實驗室外套應(yīng)放在實驗室入口處，不得在實驗室外使用。
生物安全柜既可以提供無菌的條件，而且還可以控制傳染性的飛濺物或氣溶膠。
為滿足多樣化的研究需要，生物安全柜一般有I、II、III三類。
I 類層安全柜為實驗室工作人員和環(huán)境提供了基本水平的保護，但它們不能保護培養(yǎng)物免受污染。 它們在設(shè)計和氣流特性方面與化學通風柜基本相同。
對于涉及 BSL-1、2 和 3 材料的工作或者細胞培養(yǎng)時為了處理有害物質(zhì)（例如，靈長類動物培養(yǎng)物、病毒感染培養(yǎng)物、放射性同位素、致癌或有毒試劑），應(yīng)使用 II 類生物安全柜。
清潔工作臺：垂直層流或水平層流潔凈工作臺是將經(jīng)過 HEPA 過濾的空氣從機柜后部穿過工作臺表面有助于保護樣品而不是工作人員。

2.振蕩培養(yǎng)箱：
為了在 30-40 0 C下為細胞生長提供合適的溫度環(huán)境，需要一個培養(yǎng)箱。
根據(jù)培養(yǎng)的細胞類型，孵育溫度會有所不同。
CO2 振蕩培養(yǎng)箱時一種可以自動進行控溫、濕度和氣體調(diào)節(jié)的培養(yǎng)箱，可以使培養(yǎng)基中，CO2 的濃度與碳酸氫鈉保持平衡。細胞培養(yǎng)時，一般保持培養(yǎng)箱中保持 2-5% CO2 氣體含量。

3.用于標本保存的超低溫冰箱和低溫冰柜（-20 ° C） ：
冰箱和冰柜對于在 2–8°C 下儲存液體培養(yǎng)基以及在 –5°C 到 –20°C 下儲存酶（例如胰蛋白酶）和某些培養(yǎng)基成分（例如谷氨酰胺和血清）都非常重要。
要儲存培養(yǎng)基和緩沖液，需要冰箱或冷藏室。 
需要低溫冰箱來保存預(yù)先分裝的血清、營養(yǎng)物質(zhì)和抗生素。 
低溫儲存
隨著傳代次數(shù)的增加，連續(xù)培養(yǎng)的細胞系遺傳不穩(wěn)定的可能性很大，因此，有必要制備細胞的工作原液并保存在低溫儲存中。
需要注意的是，細胞不應(yīng)儲存在 20 o C 或 -80 o C 的冰箱中，因為當它們不在這些溫度下儲存時，它們的活力會降低。

4.顯微鏡：
檢查細胞一般使用倒置顯微鏡即可。
盡管染色體分析或放射自顯影工作需要非常高質(zhì)量的顯微鏡，但放大倍數(shù)為 X100 的簡單的光學顯微鏡足以在血細胞計數(shù)器中進行常規(guī)細胞計數(shù)。

5 、組織培養(yǎng)器皿：
多種組織培養(yǎng)塑料器皿，最常見的是經(jīng)過特殊處理的聚苯乙烯。 
少量的細胞培養(yǎng)一般在25 cm2 或 75 cm2培養(yǎng)皿或細胞培養(yǎng)瓶中進行，而后再轉(zhuǎn)移至搖瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中擴培，大規(guī)模細胞培養(yǎng)還需要借助生物反應(yīng)器等設(shè)備。

6.清洗消毒設(shè)施：
玻璃器皿如移液器應(yīng)浸泡在合適的清潔劑中，然后經(jīng)過嚴格的洗滌程序，在干燥和滅菌之前用蒸餾水徹底浸泡。
玻璃器皿如移液管、錐形瓶、燒杯（用鋁箔覆蓋）在 160°C 的熱空氣烘箱中消毒一小時。
所有其他設(shè)備，如自動移液器吸頭和瓶子（蓋子松散連接）均通過 121 °C 高壓滅菌 20 分鐘進行滅菌。

7.純水制備或反滲透裝置：
為了準備培養(yǎng)基和沖洗玻璃器皿，需要雙蒸或反滲透水供應(yīng)。
應(yīng)定期檢查雙蒸水的 pH 值，因為在某些情況下可能會有所不同。
使用的水質(zhì)量的變化可能會導致結(jié)果的變化，因此有必要使用單一來源的水。
通過高壓滅菌將水在 121 °C 下滅菌 20 分鐘。

8.過濾除菌
不能高壓滅菌的培養(yǎng)基必須通過孔徑為 0.22 μm 的膜過濾器進行滅菌。

9.離心機
為了增加細胞濃度或洗去試劑，細胞懸液需要進行離心操作。
可以使用的離心機有臺式離心機、小型離心機、落地式離心機和冷凍離心機等。

其他擴展設(shè)備和附加用品：
用于動物培養(yǎng)的其他附加實驗室設(shè)備和耗材如下：
蠕動泵貨真空泵
PH計
細胞生物反應(yīng)器【大規(guī)模培養(yǎng)】
共聚焦顯微鏡
流式細胞儀
細胞培養(yǎng)瓶
細胞培養(yǎng)皿
滾瓶或搖瓶、細胞培養(yǎng)瓶
移液器和移液器吸頭
廢物容器
培養(yǎng)基、血清和試劑
細胞

1. pH計：
PH計是一種計算溶液中氫離子（酸度或堿度）活度的電子儀器。
pH 計必須包括連接到 pH 響應(yīng)電極和參考（不變）電極的電壓表。
pH 響應(yīng)電極通常是玻璃，汞-氯化亞汞（甘汞）電極通常是參考電極，但有時也使用銀-氯化銀電極。

2.共聚焦顯微鏡：
共聚焦顯微鏡是一種特殊類型的標準熒光顯微鏡（也稱為寬場熒光顯微鏡），它使用特定的光學組件產(chǎn)生用熒光探針染色的材料的高分辨率圖像。

3 . 流式細胞儀：
流式細胞術(shù)是一種細胞分析方法，在 1950 年代首次用于確定流體流中的細胞體積，當它們在觀察孔前流動時，流體流會快速循環(huán)。
流體、光學和電子是流式細胞儀的三個主要組成部分。
樣品從樣品管到流動池的傳輸是流式細胞儀的流體系統(tǒng)的功能。
樣品要么被分選（在細胞分選機的情況下），要么在通過流通池（并通過激光）后被運送到廢物中。
光學系統(tǒng)組件包括激發(fā)光源、透鏡和用于在儀器周圍捕獲和移動光的濾光片以及光電流產(chǎn)生檢測系統(tǒng)。

4 . 細胞培養(yǎng)容器：
所有的培養(yǎng)細胞的容器起初都是玻璃的。
與塑料相比，玻璃的缺點包括重量大、成本高、清潔勞動強度大和顯微鏡觀察效果差。
1960 年代為聚苯乙烯開發(fā)了表面處理技術(shù)，使塑料容器能夠代替玻璃用于大多數(shù)細胞培養(yǎng)應(yīng)用。

培養(yǎng)瓶瓶說明	生長面積(cm 2 )	推薦工作體積 (ml)	細胞產(chǎn)量
T-25	25	5-10	2.5×10 6
T-75	75	15-25	7.5×10 6
T-150	150	30-50	15.0 X 10 6
T-175	175	35-60	17.5 X 10 6
T-225	225	45-75	22.5 X 10 6

A.。細胞培養(yǎng)皿：
細胞培養(yǎng)皿提供了較佳的經(jīng)濟性和進入生長表面的途徑。
它們應(yīng)該與二氧化碳振蕩培養(yǎng)箱一起使用。
大多數(shù)制造商提供四種培養(yǎng)皿：35 毫米、60 毫米、100 毫米和 150 毫米。
細胞培養(yǎng)皿主要用于培養(yǎng)貼壁細胞。

細胞培養(yǎng)皿說明	生長良好 (cm 2 )	工作容積(ml)	細胞產(chǎn)量
96孔	0.32	0.1-0.2	0.32×10 5
48孔	1.00	0.3-0.6	0.8×10 5
24孔	1.88	0.5-1.2	1.9×10 5
12孔	3.83	1.0-2.4	3.8×10 5
6孔	9.40	2.0-3.0	9.5×10 5

B。 滾瓶：
為了增加貼壁細胞數(shù)量，一般使用滾瓶、搖瓶培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)瓶的使用與燒瓶基本相同但勞動力大大減少。

滾瓶的說明	生長面積（cm 2）	工作容積(mL)	細胞產(chǎn)量
小的	490	100-150	4.9×10 5
標準	850	170-250	8.5×10 5
制藥	1750	340-500	17.5 X 10 5

 
C . 移液器和移液管：
血清移液管是一種相對常見的實驗室儀器，用于轉(zhuǎn)移毫升體積的液體。
為了計算被吸出或分配的液體體積，血清移液管通常沿其側(cè)面有刻度。
這些儀器最常與移液器分液器一起使用，通過產(chǎn)生部分真空來增強液體轉(zhuǎn)移。
根據(jù)您想要通過的體積量，相同的移液器分液器可與多種血清移液器尺寸一起使用。
血清移液管通常是可消毒和可重復(fù)使用的，可以是塑料的、無菌的、一次性的或玻璃的。
對于液體的轉(zhuǎn)移可使用移液器來進行操作。

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