酵母雙雜交技術的原理和優(yōu)勢
蛋白互作是驗證基因或疾病作用機理不可或缺的一環(huán)，常用的檢測方法有：酵母雙雜、串聯親和純化、co-IP、FRET、熒光蛋白（螢光素酶）融合等。不同的檢測方法各有優(yōu)勢，本期將介紹酵母雙雜的原理和優(yōu)勢。
· 酵母雙雜的原理 ·
酵母作為一種真核生物，其基因的轉錄需要反式作用因子的參與。反式作用因子GAL4由DNA結合域（BD）和轉錄激活域（AD)組成，完整的GAL4能結合至啟動子上游順式作用元件并啟動轉錄，導致下游基因的表達。
在構建機制上，可將已知蛋白與BD構建為融合蛋白，將待測蛋白和AD構建為融合蛋白，若已知蛋白與待測蛋白存在相互作用，則兩者相互結合，導致BD與AD在空間上的距離非常相近，發(fā)揮完整的反式作用因子功能，啟動下游報告基因表達，可通過檢測報告基因的表達判斷蛋白的互作水平。
在實際應用中，通常有大量商業(yè)化產品直接使用，如AH109菌株，其既不能產生GAL4，又是Trp和Leu缺陷型菌株，無法在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基中生長。當兩種配套載體所表達的融合蛋白能夠相互作用時，完整的反式作用因子能夠激活酵母中基因表達，使得酵母可在營養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基上生長，達到篩選互作蛋白的功能。
基于AD/BD的核系統(tǒng)酵母雙雜交原理
· 優(yōu)勢和局限 ·
酵母雙雜的優(yōu)勢在于，其實驗操作過程相對簡單，實驗結果易檢測；同時酵母生長速度快，可通過高通量庫篩，快速獲得大量與已知蛋白有互作的潛在蛋白，在初步篩選中具有重要應用。
但其劣勢在于，酵母雙雜的假陽性較高，實驗結果需多次重復，或用其他互作方法驗證，且基于AD/BD的酵母雙雜僅能驗證核內蛋白的互作，對于定位于核外蛋白，膜蛋白，或蛋白互作后定位轉移的蛋白，檢測結果可信度不高。針對此類蛋白，科研人員開發(fā)了基于分離半泛素融合的膜系統(tǒng)酵母雙雜交。
酵母雙雜的優(yōu)勢在于，其實驗操作過程相對簡單，實驗結果易檢測；同時酵母生長速度快，可通過高通量庫篩，快速獲得大量與已知蛋白有互作的潛在蛋白，在初步篩選中具有重要應用。
但其劣勢在于，酵母雙雜的假陽性較高，實驗結果需多次重復，或用其他互作方法驗證，且基于AD/BD的酵母雙雜僅能驗證核內蛋白的互作，對于定位于核外蛋白，膜蛋白，或蛋白互作后定位轉移的蛋白，檢測結果可信度不高。針對此類蛋白，科研人員開發(fā)了基于分離半泛素融合的膜系統(tǒng)酵母雙雜交。
