通道載玻片--受牙齦菌感染的Ca9-22細胞中IL-33免疫熒光染色實驗

細胞的免疫熒光實驗是一個基礎的細胞實驗，傳統(tǒng)的方法是在培養(yǎng)板中放入預先處理好的蓋玻片，待細胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定，染色等系列工作。為了簡化這一工作，一系列底部適合直接成像的細胞耗材應運而生，如圖：

日本的科研人員在研究細胞因子IL-33在Ca9-22細胞中免疫熒光染色試驗時使用了一種通道載玻片。IL-33是一種在內皮細胞中常規(guī)表達的細胞因子，其參與調節(jié)了先天免疫細胞的Th2 細胞因子介導的免疫應答。研究人員想研究增強IL-33表達的牙周內皮細胞中牙周菌Porphyromonas gingivalis所發(fā)揮的作用。研究人員使用牙周菌P.gingivalis刺激Ca9-22細胞，再測試其中IL-33的表達。

Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells

H. Tada, T. Matsuyama, T. Nishioka, M. Hagiwara, Y. Kiyoura, H. Shimauchi and K. Matsushita

PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

一）實驗材料：

1）Ca9-22細胞

2）牙周菌P.gingivalis      50 μg/ml

3）多聚甲醛溶液            4%

4）BSA                    1%PBST溶液

5）藻紅蛋白偶聯(lián)的大鼠抗人IL-33抗體  （clone, 390412; R&D Systems）

6）DAPI

8）六通道載玻片          ibiTreat，德國ibidi公司，80606

圖一：通道載玻片示意圖。細胞的免疫熒光實驗簡化，并且節(jié)約試劑（單通道30μl），細胞分布及其均勻，成效效果好。

二）實驗步驟

1）單通道鋪入3×10⁵ Ca9-22細胞，37℃,5%CO2環(huán)境中孵育過夜待細胞貼壁。

2）使用無細胞培養(yǎng)基，輕輕沖洗通道，移除未貼壁細胞（圖二）。

圖二：沖洗換液方法，藍色代表新的無細胞培養(yǎng)基

3）用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，（MOI為0.13）加入通道中，刺激Ca9-22細胞4天

4）用4%的多聚甲醛固定15分鐘

5）用1%BSA的PBST溶液封閉30分鐘

6）使用0.5μg/ml的藻紅蛋白偶聯(lián)的大鼠抗人IL-33抗體4℃孵育1小時

7）DAPI孵育1分鐘

8）用熒光顯微鏡觀測數(shù)據(jù)。

• 實驗結果

圖三：牙周菌P.gingivalis增強牙周內皮細胞中IL-33的表達。用50 μg/ml牙周菌P.gingivalis，刺激Ca9-22細胞后使IL-33（紅色）表達有顯著的提高。細胞核（藍色）