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超分辨率顯微鏡技術(shù)解析:以更多細(xì)節(jié)研究亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)

瀏覽次數(shù):469 發(fā)布日期:2025-7-25  來源:徠卡顯微鏡
以空前的細(xì)節(jié)探索生命的真實(shí)本質(zhì)    

超分辨率光學(xué)顯微鏡使您能夠以更多的細(xì)節(jié)研究亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)。使用 LIGHTNING 技術(shù)時(shí),共聚焦圖像采集的空間分辨率提高了一倍,而使用 STED 時(shí)可以在納米尺度上提供洞察。了解更多關(guān)于徠卡顯微系統(tǒng)超分辨率方法的信息,以及它們?nèi)绾卧诓《緦W(xué)、免疫學(xué)、神經(jīng)科學(xué)和癌癥研究領(lǐng)域推動(dòng)新發(fā)現(xiàn)。
 
什么是超分辨率顯微鏡?
超分辨率顯微鏡是一種光學(xué)成像技術(shù),克服了光的衍射極限,允許以比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡更多的細(xì)節(jié)可視化亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)。使用 STED(受激發(fā)射損耗)和納米成像可以實(shí)現(xiàn) 30 納米的分辨率。納米級(jí)分辨率揭示了關(guān)于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和相互作用的更多細(xì)節(jié)信息。 

超分辨率顯微鏡在病毒學(xué)、免疫學(xué)、神經(jīng)科學(xué)和癌癥研究領(lǐng)域推動(dòng)了突破性的發(fā)現(xiàn)。
用于細(xì)胞生物學(xué)應(yīng)用的多彩 TauSTED Xtend 775,要求對(duì)多個(gè)細(xì)胞組分進(jìn)行納米級(jí)分辨率成像。細(xì)胞顯示出波形蛋白纖維(AF 594)、肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)(ATTO 647N)和核孔籃(CF 680R)。樣本由布里吉特·貝爾格納、馬里亞諾·岡薩雷斯·皮斯菲爾、斯特芬·迪特策爾提供,生物醫(yī)學(xué)中心生物成像核心設(shè)施,路德維希-馬克西米利安大學(xué),德國慕尼黑。

關(guān)于超分辨率
 
由于光的衍射極限,“傳統(tǒng)”的熒光顯微鏡技術(shù)無法分辨低于 240 納米的結(jié)構(gòu)。因?yàn)樯飳W(xué)并不止步于這個(gè)尺度,因此所謂的超分辨率顯微鏡技術(shù)是不可或缺的。LIGHTNING 和 STED 是兩種引人注目的徠卡顯微系統(tǒng)超分辨率共聚焦方法,用于以更高的精度展示結(jié)構(gòu),并揭示無法看到的細(xì)節(jié)。 

LIGHTNING 檢測(cè)概念基于自適應(yīng)去卷積,有效地將橫向分辨率提高到 120 納米。使用 LIGHTNING,您可以探測(cè)從微管動(dòng)態(tài)到亞細(xì)胞區(qū)室結(jié)構(gòu)的樣本。 

STED 納米顯微鏡將超分辨率提升到一個(gè)新的水平,使您能夠常規(guī)地實(shí)現(xiàn)低于 30 納米的橫向分辨率。通過 STED,您可以在體內(nèi)剖析細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能,例如染色質(zhì)和核孔的重組、神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的微小變化、線粒體和突觸囊泡的細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、病毒顆粒的進(jìn)入、蛋白質(zhì)復(fù)合物的共定位等。
細(xì)菌鞭毛的圖像:相關(guān)的三色共聚焦-LIGHTNING-STED 成像允許同時(shí)使用互補(bǔ)的方法來研究和驗(yàn)證樣本。樣本由德國柏林洪堡大學(xué)的 Marc Erhardt 提供。
 
超分辨率顯微鏡是如何工作的?
超分辨率顯微鏡可以通過多種方式進(jìn)行。 

● LIGHTNING 檢測(cè)概念使超分辨率共聚焦顯微鏡成為可能。與傳統(tǒng)的去卷積技術(shù)使用全圖像的全局參數(shù)集不同,它基于一種自適應(yīng)去卷積過程,該過程使用體素特定的決策掩模來尋找合適的去卷積參數(shù)。得益于強(qiáng)大的 GPU 計(jì)算,LIGHTNING 能夠在近實(shí)時(shí)的情況下同時(shí)處理多種顏色。結(jié)合共振掃描儀,它還提供了大視場(chǎng)和高幀率。
 
● 受激發(fā)射損耗(STED)方法與共聚焦技術(shù)結(jié)合,可實(shí)現(xiàn)超分辨率熒光顯微術(shù)。STED支持多通道成像,并在三維空間內(nèi)實(shí)現(xiàn)各向同性的超分辨率成像。其原理基于:使用激發(fā)熒光團(tuán)的波長照射衍射極限光斑,同時(shí)以引發(fā)退激發(fā)或受激發(fā)射的波長照射環(huán)形區(qū)域。此設(shè)計(jì)使僅有亞衍射區(qū)域處于激發(fā)態(tài),從而實(shí)現(xiàn)比傳統(tǒng)衍射極限光學(xué)顯微術(shù)更高的分辨率。徠卡顯微系統(tǒng)的獨(dú)特TauSTED功能可在提升STED分辨率的同時(shí),消除不必要的背景噪聲。


FluoCells 小鼠腸道切片。杯狀細(xì)胞的粘液,灰色,Alexa Fluor 350 WGA。細(xì)胞核,綠色,SYTOX Green。絲狀肌動(dòng)蛋白,紅色,Alexa Fluor 568 phalloidin。

超分辨率顯微鏡與電子顯微鏡有什么區(qū)別?

超分辨率顯微鏡利用可見光光學(xué)來可視化樣本,而電子顯微鏡則利用電子束對(duì)樣本進(jìn)行成像。這兩種技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn),但只有超分辨率顯微鏡提供了對(duì)活體標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)、標(biāo)記多個(gè)分子靶標(biāo)以賦予其特定對(duì)比度以及方便樣本準(zhǔn)備的優(yōu)勢(shì)。

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