利用CytoFLEX mosaic實(shí)現(xiàn)30色光譜流式檢測(cè)移植優(yōu)化

 
研究背景：為什么要開(kāi)展這項(xiàng)研究？
肥胖誘發(fā)的慢性炎癥（meta-inflammation），會(huì)引發(fā)代謝器官（如肝臟與脂肪組織）的免疫系統(tǒng)紊亂，進(jìn)一步導(dǎo)致脂肪肝和2型糖尿病。為深入研究這些免疫變化，荷蘭萊頓大學(xué)醫(yī)學(xué)中心開(kāi)發(fā)了一套30色光譜流式抗體組合方案，專(zhuān)用于小鼠肝臟和白色脂肪組織中免疫細(xì)胞的檢測(cè)，尤其聚焦于巨噬細(xì)胞亞群及其活化狀態(tài)。
 
所用平臺(tái)是什么？使用CytoFLEX mosaic的意義何在？
該研究在CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀上搭載CytoFLEX mosaic光譜檢測(cè)模塊進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了OMIP-104抗體組合方案在該平臺(tái)上的兼容性與性能。
實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察了三方面：

• 抗體panel在肝臟樣本的移植便捷性
• CytoFLEX mosaic平臺(tái)下的檢測(cè)性能
• 對(duì)復(fù)雜組織樣本中自體熒光的解混能力

 
實(shí)驗(yàn)方法：如何進(jìn)行樣本準(zhǔn)備與染色？

• 采用文獻(xiàn)[1]中OMIP-104方案的制備與染色方法。
• 小鼠飼喂高脂高膽固醇西式飼料，富集肝臟CD45+免疫細(xì)胞。
• 將6只雄性小鼠的白細(xì)胞混合分析。
• 單染對(duì)照、FMO對(duì)照和自體熒光檢測(cè)按標(biāo)準(zhǔn)流程執(zhí)行。

如需詳細(xì)步驟，可參閱文獻(xiàn)1的補(bǔ)充材料。
 
結(jié)果展示：數(shù)據(jù)圖解析及平臺(tái)性能

圖1：熒光染料相似性矩陣
使用CytExpert for Spectral軟件生成，復(fù)雜度評(píng)分為11.0，評(píng)估panel中染料間的光譜重疊程度。

圖2：熒光光譜預(yù)覽圖
展示本抗體組合的完整光譜特征，便于評(píng)估染料組合互補(bǔ)性。

圖3：設(shè)門(mén)策略與FMO對(duì)照
A) 明確區(qū)分主要免疫細(xì)胞群，如CD45+CD31-白細(xì)胞。
B) 針對(duì)多個(gè)活化標(biāo)志物進(jìn)行FMO控制，確保門(mén)策略科學(xué)可靠。

圖4：多重自體熒光解混效果
A) 單種自體熒光特征解混
B) 多達(dá)4種特征聯(lián)合處理，顯著提升肝臟樣本中信噪比。
數(shù)據(jù)分析通過(guò)Cytobank平臺(tái)完成。
 
結(jié)論總結(jié)：CytoFLEX mosaic的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在哪里？

• 雖然OMIP-104原方案非專(zhuān)為CytoFLEX mosaic設(shè)計(jì)，但本研究驗(yàn)證其可無(wú)縫移植。
• 使用mosaic模塊后，成功鑒定出全部關(guān)鍵免疫群體。
• 若進(jìn)一步重新滴定抗體濃度并采用適配808 nm激光的熒光染料，panel性能可再次優(yōu)化。
• 本研究為將其他平臺(tái)抗體組合方案遷移至CytoFLEX mosaic光譜平臺(tái)提供了實(shí)證參考，增強(qiáng)了其在高維免疫分析中的靈活性與兼容性。

 
技術(shù)亮點(diǎn)回顧
雙擎驅(qū)動(dòng)，洞見(jiàn)多維
CytoFLEX mosaic采用雙光學(xué)路徑 + 雙算法引擎設(shè)計(jì)，搭配智能化操作軟件，顯著提升多參數(shù)光譜流式分析的靈活性與準(zhǔn)確性，助力科研人員實(shí)現(xiàn)高維單細(xì)胞免疫圖譜的構(gòu)建與解譯。
 
引用參考

1. Lambooij JM, Tak T, Zaldumbide A, Guigas B. OMIP-104: A 30-color spectral flow cytometry panel for comprehensive analysis of immune cell composition and macrophage subsets in mouse metabolic organs. Cytometry. 2024;105(7):493–500.