CytoFLEX mosaic光譜流式如何解決自發(fā)熒光干擾

什么是自發(fā)熒光（Autofluorescence, AF）？
自發(fā)熒光是指細胞本身的內源性物質（如NADH、FAD、芳香族氨基酸等）在特定波長激發(fā)下產生的熒光信號。
在流式細胞術中，自發(fā)熒光會干擾弱標記信號的檢測，尤其在400–600 nm波段影響嚴重，導致：

• 熒光信號識別不清，弱陽性信號被掩蓋
• 髓系細胞、死細胞等高AF細胞造成假陽性
• 結果可重復性與分析特異性降低

 
為什么光譜流式也難以直接解決AF問題？
盡管光譜流式細胞術具備全波段光譜解混能力，但自發(fā)熒光仍是挑戰(zhàn)：

難點	表現
異質性強	不同細胞AF光譜差異大，難統(tǒng)一建模
信號疊加	高AF會掩蓋低豐度靶標
光譜重疊	AF光譜與染料發(fā)射譜重合，易誤判

圖：AF在光譜流式中的典型干擾
圖示案例中展示了：
A. 各類細胞AF背景差異
B. 高AF導致弱信號消失
C. AF與目標染料光譜重合，干擾解混
 
 CytoFLEX mosaic如何破解AF干擾？
貝克曼庫爾特CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀，從底層設計上強化了解決AF問題的能力：
核心優(yōu)勢：

• 提供10個未染色通道：支持多通道AF提取建模
•  支持異質性樣本分析：構建不同細胞群的AF特征
•  搭載Poisson Hybrid解混算法：提升信號精度，降低假陽性率
• 實時異常通道預警機制：確保數據準確可靠

 
實驗驗證：AF建模如何改善數據質量？
使用CytoFLEX mosaic評估白細胞群體譜解混效果。通過分別引入0、1、2、4個自發(fā)熒光特征，比較CD16在不同白細胞亞群中的表達結果：

• 未去除AF時，假陽性信號較多
• 去除4個AF特征后，保留真實信號，明顯提升弱信號可分辨性
• 涉及細胞群體：中性粒細胞、嗜酸粒細胞、單核細胞、淋巴細胞

結論：AF提取+多通道解混顯著提升了解析準確性。
 
光譜流式中自發(fā)熒光的四大應對策略

策略	說明
1. 將AF視為內源性熒光	可利用其光譜特征提高低豐度標記識別能力
2. 使用多對照捕獲AF變異	CytoFLEX mosaic支持10個未染色通道，適用于復雜樣本
3. 使用微球/細胞對照校正串聯染料	防止AF疊加影響解混
4. 結合降維、門控聚類方法	Poisson Hybrid算法提高解混分群精度

 
軟件支持與用戶體驗
CytoFLEX mosaic搭配的軟件 CytExpert for Spectral：

• 界面簡潔，易于上手
• 解混結果實時驗證，支持通道問題自動提示
• 圖形化顯示，有效輔助策略優(yōu)化與門控調整

推薦閱讀與參考資料

1. Overcoming Autofluorescence in Spectral Flow Cytometry Analysis
2. Enhanced Spectral Unmixing of White Blood Cell Populations

結語：精準識別，從自發(fā)熒光開始
光譜流式不再“怕光”！
CytoFLEX mosaic通過自發(fā)熒光多通道提取 + 高級算法，打破AF困境，重塑多色流式分辨率上限。是實現高靈敏、低背景、弱信號可見化的關鍵利器。