免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）實(shí)驗(yàn)全面詳解

免疫組織化學(xué)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC），是利用免疫學(xué)方法，用已知的特異性抗體（或抗原）對(duì)組織細(xì)胞中相應(yīng)的抗原（或抗體）進(jìn)行檢測(cè)，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯色劑（酶、金屬離子等），顯示出顏色，借助顯微鏡可觀察到組織細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物顯示出的特異性抗原-抗體結(jié)合物（陽(yáng)性反應(yīng)）。應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。

它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來(lái)，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。

免疫組化是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)是標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。

免疫組化主要用的是組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，組織標(biāo)本包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片。石蠟切片，對(duì)組織形態(tài)保存好，保存時(shí)間也長(zhǎng)，雖然對(duì)組織抗原暴露有影響，但可以抗原修復(fù)，所以石蠟切片仍然是首選的標(biāo)本制作方法。

一、實(shí)驗(yàn)流程：
1）組織標(biāo)本的固定和石蠟包埋；
2）石蠟標(biāo)本的切片；
3）常規(guī)染色（HE染色）或特殊病理染色；
4）組織、細(xì)胞標(biāo)本的免疫組化檢測(cè)；
5）圖片拍照、圖片分析和數(shù)據(jù)分析。

二、免疫組化步驟詳解：
1、在60°烤箱烤片30~60min，這一步是為了使蠟片水分蒸發(fā)和石蠟融化，好讓組織切片牢固貼在玻片上。做切片是免疫組化的前提切片子最好是找專業(yè)培訓(xùn)郭的人員切片，片子的厚薄均勻，切片的完整，無(wú)褶無(wú)刀痕。
2、脫蠟水化，依次放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自來(lái)水洗一下，但不要直接對(duì)著切片沖洗。
3、抗原修復(fù)，小編用的是高壓熱修復(fù)，ph6.0的檸檬酸鹽緩沖液，一定要全部浸泡切片，等高壓鍋冒氣后5min結(jié)束，自然冷卻，溫度劇降可能引起脫片哦。3%H202避光浸泡15min。
4、用免疫組化油筆圍繞組織畫圈，接下來(lái)就能看見它的功效了。PBS洗5min*3次。PBS會(huì)被鎖在畫的圈中，不會(huì)流干，保證不干片。

三、免疫組化的意義：
⑴惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷
⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位
⑶對(duì)某類腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型
⑷確認(rèn)組織類型和種類
⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶
⑹為臨床提供治療方案的選擇

四、服務(wù)流程：
（1）客戶提供凍存組織，固定/包埋的組織，切片，相關(guān)文獻(xiàn)等；若進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)，需進(jìn)行細(xì)胞爬片；
（2）需提供一抗（包括抗體說明書，抗體需滿足IHC使用）（若無(wú)一抗，可有償使用公司備存抗體或代購(gòu)）。
（3）最后提供給客戶免疫組化圖片，玻片，實(shí)驗(yàn)報(bào)告單等。