瑞孚迪推出新品pHSense™ Eu敏感型探針量化ADC內(nèi)吞

來源：瑞孚迪生命科學
作者：芝士拉滿

在腫瘤治療領(lǐng)域，抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）正成為精準醫(yī)療的明星選手，目前全球已有15款ADC藥物獲批，全球在研ADC藥物數(shù)量龐大，中國藥企研發(fā)管線占全球40%以上。ADC藥物憑借精準治療優(yōu)勢和持續(xù)的技術(shù)創(chuàng)新，未來將成為全球抗腫瘤藥物市場的重要支柱。

ADC藥物的核心在于其獨特的三部曲設計，抗體負責靶向識別腫瘤細胞表面抗原。連接子連接抗體與細胞毒性藥物。細胞毒素，如微管抑制劑（MMAE）、DNA損傷劑（DM1）等在細胞內(nèi)釋放，直接殺傷腫瘤細胞。

ADC藥物的作用機制可概括為以下四個步驟：
靶向結(jié)合：抗體與腫瘤細胞表面抗原結(jié)合，形成ADC-抗原復合物
內(nèi)吞作用：ADC復合物通過受體介導的內(nèi)吞作用被內(nèi)化
藥物釋放：內(nèi)體與溶酶體融合，酸性環(huán)境下ADC降解并釋放細胞毒素
細胞凋亡：藥物誘導腫瘤細胞死亡，同時可通過旁觀者效應影響鄰近細胞

圖片來源：Iris-biotech

在ADC藥物研發(fā)中，內(nèi)吞作用至關(guān)重要。內(nèi)吞作用不僅影響藥物的釋放效率，還決定了藥物是否能夠發(fā)揮旁觀者效應，以及是否會導致劑量限制毒性。此外，內(nèi)吞作用的效率和途徑與ADC的療效密切相關(guān)，因此在藥物研發(fā)早期階段需要篩選出具有最佳內(nèi)吞特性的ADC分子。

瑞孚迪（Revvity）推出全新方案pHSense™ pH敏感型Eu探針用于量化ADC內(nèi)吞
pHSense™ Eu探針是瑞孚迪近期推出的新一代鑭系銪穴狀化合物，專為內(nèi)化研究而開發(fā)。它具有獨特的二維pH敏感性，當pH值為中性/堿性時，其620nm發(fā)射光信號非常低，而當pH值下降至酸性時，620nm發(fā)射光信號強度顯著上升。除此之外，620nm發(fā)射光的壽命也會隨pH值變化而改變，趨勢表現(xiàn)為隨著pH值下降，620nm發(fā)射光壽命延長，因此可實現(xiàn)時間分辨熒光（TRF)檢測。憑借獨特的二維pH靈敏度特性，pHSense™ Eu探針可實現(xiàn)高靈敏、高檢測窗口的ADC抗體內(nèi)吞檢測。

適用于貼壁細胞和懸浮細胞的精簡型內(nèi)吞作用檢測流程
瑞孚迪提供即用型pHSense™ Eu Fab anti human/mouse IgG，可特異性識別人或小鼠IgG抗體的Fc片段，實現(xiàn)抗體的標記。標記過程無需額外的分離純化步驟，只需15-30分鐘即可完成標記，可實現(xiàn)方便靈活的抗體內(nèi)化高通量篩選。

整個實驗流程僅需四步，且只需在細胞培養(yǎng)板操作即可。以貼壁細胞為示例，步驟為：細胞過夜培養(yǎng)-棄培養(yǎng)基上清-加ADC&Fab-Eu預混物-讀數(shù)，全程無需洗滌，支持實時監(jiān)測。同時，獨家基于酶標儀讀取數(shù)值的檢測形式，大大提高了實驗的效率和通量，且支持96&384-wells通量。

卓越的信噪比，提供更可靠的藥理學數(shù)據(jù)，適用于抗體以及ADC內(nèi)化
左圖使用2nM的pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG試劑標記后的Trastuzumab抗體，加入過表達HER2的BT-474細胞中，37°C孵育，使用酶標儀動態(tài)檢測620nm發(fā)射光，隨著時間可清晰觀察到特異性抗體內(nèi)化信號，而Irrelevant IgG1和Fab Only對照組隨著時間推移信號保持不變，且始終表現(xiàn)出極低的背景信號。

右圖使用pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG試劑標記不同濃度的Enfortumab-vedontin ADC，加入表達了Nectin-4的SUM190-PT細胞中，37°C孵育5小時后用酶標儀檢測620nm發(fā)射光，檢測出的EC50值與已發(fā)表文獻一致。

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