免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）實驗全面詳解

免疫組織化學又稱免疫細胞化學（Immunohistochemistry，IHC），是利用免疫學方法，用已知的特異性抗體（或抗原）對組織細胞中相應(yīng)的抗原（或抗體）進行檢測，通過化學反應(yīng)使標記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯色劑（酶、金屬離子等），顯示出顏色，借助顯微鏡可觀察到組織細胞內(nèi)標記物顯示出的特異性抗原-抗體結(jié)合物（陽性反應(yīng)）。應(yīng)用免疫學及組織化學原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學技術(shù)或免疫細胞化學技術(shù)。

它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。

免疫組化是應(yīng)用免疫學基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應(yīng)是標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究。

免疫組化主要用的是組織標本和細胞標本兩大類，組織標本包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片。石蠟切片，對組織形態(tài)保存好，保存時間也長，雖然對組織抗原暴露有影響，但可以抗原修復(fù)，所以石蠟切片仍然是首選的標本制作方法。

一、實驗流程：
1）組織標本的固定和石蠟包埋；
2）石蠟標本的切片；
3）常規(guī)染色（HE染色）或特殊病理染色；
4）組織、細胞標本的免疫組化檢測；
5）圖片拍照、圖片分析和數(shù)據(jù)分析。

二、免疫組化步驟詳解：
1、在60°烤箱烤片30~60min，這一步是為了使蠟片水分蒸發(fā)和石蠟融化，好讓組織切片牢固貼在玻片上。做切片是免疫組化的前提切片子最好是找專業(yè)培訓(xùn)郭的人員切片，片子的厚薄均勻，切片的完整，無褶無刀痕。
2、脫蠟水化，依次放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自來水洗一下，但不要直接對著切片沖洗。
3、抗原修復(fù)，小編用的是高壓熱修復(fù)，ph6.0的檸檬酸鹽緩沖液，一定要全部浸泡切片，等高壓鍋冒氣后5min結(jié)束，自然冷卻，溫度劇降可能引起脫片哦。3%H202避光浸泡15min。
4、用免疫組化油筆圍繞組織畫圈，接下來就能看見它的功效了。PBS洗5min*3次。PBS會被鎖在畫的圈中，不會流干，保證不干片。

三、免疫組化的意義：
⑴惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷
⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的原發(fā)部位
⑶對某類腫瘤進行進一步的病理分型
⑷確認組織類型和種類
⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶
⑹為臨床提供治療方案的選擇

四、服務(wù)流程：
（1）客戶提供凍存組織，固定/包埋的組織，切片，相關(guān)文獻等；若進行細胞檢測，需進行細胞爬片；
（2）需提供一抗（包括抗體說明書，抗體需滿足IHC使用）（若無一抗，可有償使用公司備存抗體或代購）。
（3）最后提供給客戶免疫組化圖片，玻片，實驗報告單等。