陽離子交換填料在膠原蛋白純化中的應(yīng)用
膠原蛋白具有良好的生物學(xué)特性，在組織工程、醫(yī)療器械、醫(yī)學(xué)美容、化妝品、食品工業(yè)和包裝材料等方面都有著廣泛的應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)步，重組人源膠原蛋白的表達(dá)、純化及改性技術(shù)取得了顯著突破，不僅提高了膠原蛋白的純度、活性和安全性，還推動(dòng)了膠原蛋白產(chǎn)品的個(gè)性化發(fā)展，滿足不同消費(fèi)者的定制化需求。本文聚焦博格隆陽離子層析介質(zhì)，介紹其在重組膠原蛋白純化中的應(yīng)用。
重組膠原蛋白的生產(chǎn)工藝概述
Fig.1 重組膠原蛋白的生產(chǎn)工藝
Fig.2 SP Bestarose FF層析純化圖譜
Fig.3 CM Bestarose FF層析純化圖譜
Fig.4 Diamond CD-S層析純化圖譜
重組膠原蛋白的生產(chǎn)工藝概述
重組膠原蛋白是通過DNA重組技術(shù)制備的膠原蛋白。現(xiàn)已有多種表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用于重組膠原蛋白的生產(chǎn)，包括大腸桿菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等表達(dá)系統(tǒng)，相較動(dòng)物來源的膠原蛋白，具有產(chǎn)率高、成本低、周期短等優(yōu)勢(shì)。重組膠原蛋白的生產(chǎn)工藝路線如下圖所示，包括發(fā)酵、澄清、層析純化、濃縮/換液、無菌過濾等步驟。
Fig.1 重組膠原蛋白的生產(chǎn)工藝重組膠原蛋白對(duì)pH敏感，適合偏酸性的緩沖體系，因此常把陽離子交換層析用于可溶表達(dá)的重組膠原蛋白純化。博格隆的SP Bestarose FF和CM Bestarose FF層析介質(zhì)具有高流速和高載量特點(diǎn)，適合銜接離心澄清后的樣品，快速獲得重組膠原蛋白純品。Diamond CD-S因其高分辨率特點(diǎn)，還可作為精細(xì)純化層析步驟，去除重組膠原蛋白相關(guān)的小分子和聚體形式，實(shí)現(xiàn)高純度重組膠原蛋白的生產(chǎn)。
應(yīng)用案例
• 案例1: SP Bestarose FF層析純化重組XVII型膠原蛋白
樣品：與平衡溶液的電導(dǎo)和pH一致
樣品：與平衡溶液的電導(dǎo)和pH一致
Fig.2 SP Bestarose FF層析純化圖譜該案例中，流穿中不含目的蛋白，繼續(xù)提高電導(dǎo)進(jìn)行洗脫，獲得高純度膠原蛋白。
• 案例2: CM Bestarose FF層析純化重組XVII型膠原蛋白
樣品：電導(dǎo)4.9 mS/cm，pH4.0
• 案例2: CM Bestarose FF層析純化重組XVII型膠原蛋白
樣品：電導(dǎo)4.9 mS/cm，pH4.0
Fig.3 CM Bestarose FF層析純化圖譜該案例中，經(jīng)線性pH和電導(dǎo)優(yōu)化，分別確定洗雜和洗脫條件，最終實(shí)現(xiàn)等度洗脫工藝，一步層析純度為91.16%。
• 案例3: Diamond CD-S層析去除III型重組膠原蛋白降解片段
樣品：Diamond Phenyl（HS）捕獲的III型重組膠原蛋白，調(diào)節(jié)電導(dǎo)和pH與平衡溶液一致。
• 案例3: Diamond CD-S層析去除III型重組膠原蛋白降解片段
樣品：Diamond Phenyl（HS）捕獲的III型重組膠原蛋白，調(diào)節(jié)電導(dǎo)和pH與平衡溶液一致。
Fig.4 Diamond CD-S層析純化圖譜此案例中，Diamond Phenyl（HS）純化后的膠原蛋白仍存在少量降解形式，經(jīng)Diamond CD-S層析，降解分子流穿，洗脫獲得大部分目標(biāo)分子，且無明顯雜帶。
總結(jié)
合理的純化策略和高效的層析介質(zhì)是確保膠原蛋白產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵。博格隆陽離子層析介質(zhì)以其優(yōu)異的分離純化效果和良好的批間一致性，可廣泛應(yīng)用于膠原蛋白從實(shí)驗(yàn)室到工業(yè)化生產(chǎn)的分離純化工藝中。
相關(guān)產(chǎn)品信息
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