層析技術在抗體藥物純化中的應用
抗體藥物，包括單抗、雙抗、抗體片段、抗體偶聯(lián)藥物以及抗體融合蛋白等，具有靶向性強、特異性高和毒副作用小等特點，在自身免疫疾病與抗腫瘤領域大放異彩。面對龐大的市場需求，開發(fā)新型抗體藥物，優(yōu)化下游生產(chǎn)工藝，具有非常重要的經(jīng)濟價值與社會意義。
抗體純化工藝
抗體純化過程復雜，需結合多種分離手段設計出合理的純化流程，才能高效地獲得高質量產(chǎn)品�？贵w下游工藝通常由以下步驟構成：
- 細胞澄清收獲，通過離心和過濾等方法去除細胞和細胞碎片；
- 親和捕獲， Protein A 親和層析捕獲抗體；
- 低pH孵育去除病毒；
- 中間純化與精純，去除產(chǎn)品和過程相關雜質；
- 納濾與超濾，去除病毒獲得最終抗體產(chǎn)品。
抗體分離純化中的層析技術
捕獲
該步驟目的是從大量成分復雜的發(fā)酵液中快速捕獲目的抗體，Protein A 源于金黃色葡萄球菌，特異性結合IgG FC片段，往往一步純化即可達到90%以上的純度，能捕獲人源抗體（非IgG3）及FC融合蛋白，是捕獲抗體蛋白最有效的層析手段。低pH洗脫銜接低pH孵育，病毒可有效減少7-8 log，后續(xù)僅需1-2步純化即可完成整個抗體的純化。選擇Protein A層析介質時，載量、流速、耐堿性、使用壽命以及Protein A殘留量是主要考量因素。
中間純化與精純
為達安全純度，捕獲后的抗體樣品應進一步去除宿主蛋白、宿主DNA、聚集體、抗體片段、內毒素和脫落的Protein A等產(chǎn)品和過程相關雜質，離子交換層析與疏水層析是該步驟常用的層析手段。
離子交換層析是依據(jù)抗體與雜質的帶電性差異來實現(xiàn)分離純化的目的，是抗體純化過程中關鍵步驟。陰離子交換層析常采用流穿模式去除內毒素、病毒、HCD、HCP等雜質。而陽離子交換層析則常選擇結合洗脫模式，在酸性條件下，多數(shù)抗體結合在介質上，通過增加洗脫緩沖液中的鹽濃度或提高pH進行洗脫，除雜效果明顯，尤其是兼具高分辨率與高選擇性的陽離子交換層析介質例如MegaPoly BXS、Diamond CD-S以及Diamond SP Mustang等在去除聚集體、宿主蛋白 HCP以及Protein A 方面效果顯著。
疏水層析與離子交換層析互補，多數(shù)情況下抗體的疏水性要強于大部分雜質，主要用于抗體聚集體和 HCP 的去除。HIC 介質的疏水性對收率和雜質去除效果有較大影響，因此選擇合適的配基是疏水層析的關鍵，常見的疏水作用層析配基的疏水性強弱順序如下：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。
除此之外，例如Diamond MMC與Diamond MIX-A等兼具疏水作用與離子交換作用的多模式填料越來越受到重視，這類新型的混合模式介質對宿主蛋白、脫落的配基以及多聚體等雜質具有高效的去除能力，可有效簡化純化步驟，增加純化效率。
隨著抗體藥物在臨床治療中的廣泛應用，下游純化工藝的開發(fā)顯得越發(fā)重 要，靈活運用各種層析模式與正確選擇層析填料將為抗體純化提供更經(jīng)濟高效的工藝路線。
關于博格隆
博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質量層析介質的高新技術企業(yè)，是中國較早具備大規(guī)模生產(chǎn)分離純化介質能力的企業(yè)之一。博格隆所提供的產(chǎn)品涵蓋各類分離純化介質、預裝柱、實驗室及工業(yè)生產(chǎn)級空柱、微載體，同時提供分離純化工藝開發(fā)服務及填料定制。
