冷熱板實驗的測試方法

實驗介紹

劇烈疼痛常難以控制，嚴重影響患者生活質(zhì)量。在疼痛研究的近幾十年歷史中，科學(xué)家一直致力于復(fù)制更能反映人類疼痛特性的動物模型。這些動物模型部分再現(xiàn)了人類所表現(xiàn)的疼痛、痛覺過敏以及由輕觸、壓覺等引起的疼痛反應(yīng)等癥狀。這些模型的成功復(fù)制是研究疼痛產(chǎn)生機制的基礎(chǔ)，為人類認識疼痛機制及篩選更好的治療藥物提供了有效工具。

冷覺過敏癥的檢測是疼痛行為研究中一個非常重要的方法。冷熱板測痛儀是一款多功能的熱疼痛閾值測試儀，適用于大鼠、小鼠麻醉、鎮(zhèn)痛、神經(jīng)性疼痛的藥物篩選，為相關(guān)鎮(zhèn)痛藥物研究服務(wù)。實驗中，將小鼠置于穩(wěn)定在冰上、溫度為4°C的圓形有機玻璃板上五分鐘。當小鼠接觸冷板時，會抬起爪子，抬爪次數(shù)反映動物對冷刺激的反應(yīng)程度，通過記錄動物的反應(yīng)時間（跳躍或舔腳行為）可評估它們對熱或冷的疼痛反應(yīng)。目前用于檢測疼痛的冷板設(shè)備主要為冷熱板測痛儀，可根據(jù)溫度變化調(diào)節(jié)實現(xiàn)冷刺激或熱刺激。

設(shè)備說明

鎮(zhèn)痛儀基于金屬板設(shè)計，該板可加熱至55°C并冷卻至-2°C（環(huán)境溫度需在20°C至25°C之間）。電子恒溫器維持板溫穩(wěn)定，前面板數(shù)顯溫度計顯示板面溫度。冷熱板設(shè)計簡單且升溫降溫迅速（從環(huán)境溫度降至4°C，或升至閾值溫度用時不超過10分鐘；從4°C升至55°C需5分鐘）。溫度測量精度為0.5°C。前面板計時器顯示動物反應(yīng)所需秒數(shù)。

裝置由一個置于250 × 280 × 150 (mm) 帶蓋有機玻璃立方體箱內(nèi)的圓柱形測試室組成。蓋子固定在測試室頂部防止小鼠跳出。測試室底部的小孔用于排出融化的冰水。固定好冰塊后，將一個2毫米厚的圓形有機玻璃板緊密放置在測試室的冰塊上。使用表面溫度傳感器檢測板面溫度，傳感器置于板面后可在顯示器讀取溫度。冰塊放置5分鐘后，板面溫度穩(wěn)定在4°C。

為測試小鼠冷感覺過敏癥，將小鼠放在冰板上，計算小鼠抬爪的頻率和時間以進行評估。
 

為評估此方法，常用于測試三種小鼠疼痛模型：福爾馬林試驗、慢性收縮性損傷（CCI）等。當冷熱板測痛儀板面溫度設(shè)定為4℃時，對坐骨神經(jīng)病理性疼痛模型動物，受試藥物能明顯改變其在冷板上的抬足時間和次數(shù)。當板面溫度設(shè)定為55℃時，能準確測量動物的生理性痛閾高低，以此判定受試藥物的鎮(zhèn)痛類型和效果。為評估小鼠對有害冷的反應(yīng)，將其置于有機玻璃室的冷熱板儀器上（板溫0°C），錄像3分鐘。

三、程序說明

冷板試驗中，嚙齒動物爪子的收縮被視為刺激反應(yīng)。該試驗有助于了解冷異感和痛覺減退。冷板溫度設(shè)定為5°C。截止?jié)摲�期�?0秒。將大鼠放入冷板裝置到后爪抬起反應(yīng)之間的時間記錄為反應(yīng)時間（大鼠組測量第一次收回后爪的反應(yīng)）。在暴露于CCI的大鼠組中，受傷的后爪在所有情況下最先做出反應(yīng)。冷板溫度保持5°C，截止?jié)摲��?0秒。將大鼠放在冷板上，記錄其抬起后爪的時間。在每種情況下，受傷的爪子總是最先反應(yīng)。動物帶離籠子以進行疼痛刺激測試。

四、程序步驟

1. 建議先讓動物適應(yīng)測試室環(huán)境。
2. 使用前，用認可的消毒劑清潔冷盤表面。
3. 將冷盤表面冷卻至實驗所需溫度范圍。
4. 將動物放入測試儀器。動物一般活動受限，但未受物理束縛。
5. 記錄動物出現(xiàn)爪縮、抖動或跳躍（較少見）等痛覺反應(yīng)的潛伏期。一旦觀察到明確反應(yīng)，立即移走動物。
6. 如果在20秒內(nèi)未觀察到反應(yīng)，則移走動物。
7. 動物在無拘束狀態(tài)下進行測試，能準確反映痛覺行為�？蓪π袨闈摲�期及固定時間內(nèi)的舔足次數(shù)進行準確統(tǒng)計。