pipetty在動物布魯氏菌病檢測（RBT）中的應(yīng)用

Pipetty電動移液器在動物布魯氏菌病檢測
（虎紅平板凝集試驗RBT）中的應(yīng)用
 

   方 案 摘 要 ：

     動物布魯氏菌病危害畜牧業(yè)與公共衛(wèi)生，虎紅平板凝集試驗（RBT）是重要篩查手段，但傳統(tǒng)手動移液易產(chǎn)生誤差。本方案應(yīng)用 Pipetty 電動移液器開展 RBT 檢測，利用其高精度活塞系統(tǒng)精準移取試劑，借連續(xù)分液功能提升檢測效率。通過對比使用前后檢測準確性、重復(fù)性與耗時等指標評估效果，預(yù)期降低假陽性、假陰性率，縮短大規(guī)模樣本檢測時間，為疫病防控提供可靠技術(shù)支持。

 
  方 案 詳 情 ：
 

    RBT是目前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的布魯氏菌病抗體檢測篩選方法之一，該方法經(jīng)濟、簡單快速、易操作，可人工判讀，也可通過與人工判讀比對等效的儀器判讀。WOAHISS 或國家標準血清稀釋，與抗原進行 RBT 試驗。標準血清 1：45 稀釋應(yīng)觀察到凝集，呈陽性反應(yīng)，標準血清1：55稀釋時觀察不到凝集，呈陰性反應(yīng)。

二、‌實驗準備

1、設(shè)配和材料

① Pipetty電動移液器5-1000 μL及無菌槍頭。
② 混勻棒、計時器。
③ 反應(yīng)板。
 

① 布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原。
② 布魯氏菌陽性對照血清和陰性對照血清。
 
三、實驗步驟

1、在每次開始檢測樣品前，應(yīng)用陽性對照血清和陰性對照血清分別與抗原進行反應(yīng)，以確保試驗條件適于檢測。
2、將待檢血清和抗原從冰箱取出，平衡至室溫（22 ℃±4 ℃）。
3、使用Pipetty自動混勻功能輕輕混勻待檢血清后，設(shè)置連續(xù)分液模式，單次分液30μL，次數(shù)可按實驗需求設(shè)置，等量加到反應(yīng)板上。

 
4、輕輕混勻抗原，在每份血清旁等量滴加30μL等量抗原。
5、立即將血清與抗原混合（每個樣品用一個干凈的混勻棒），混合成直徑約2cm的圓形或橢圓形。
 
6、 雙手端起反應(yīng)板，按不同方向輕輕搖晃反應(yīng)板，室溫（22 ℃±4 ℃）下作用4min后，在自然光或強燈光下立即觀察凝集情況。
注：檢測山羊和綿羊血清時，待檢血清與抗原的比例調(diào)整為3：1（如75μL血清：25μL抗原）能提高其檢測靈敏性。

四、結(jié)果判定

1、凝集反應(yīng)程度分為5個等級：

a） ++++：出現(xiàn)大的凝集片或顆粒，凝集塊間液體完全清亮透明;
b） +++：有明顯凝集顆粒，凝集塊間液體幾乎清亮透明;
c） ++：有較明顯凝集顆粒，凝集塊間液體稍清亮透明;
d） +：有微弱凝集，凝集物間液體渾濁;
e） -：無凝集，反應(yīng)混合液均勻渾濁。
 
2、同時滿足下列條件，判定試驗條件成立：
a）陽性對照血清出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象;
b）陰性對照血清無凝集“-”。
 
3、符合上述條件，結(jié)果判定如下：
a）待檢血清出現(xiàn)“+”及以上凝集現(xiàn)象時，判定為陽性;
b）待檢血清出現(xiàn)“-”時，判定為陰性。