Pipetty電動(dòng)移液器在登革熱血清檢測(cè)（Mac-ELISA）中的應(yīng)用

方案摘要：本方案聚焦 Pipetty 電動(dòng)移液器在登革熱血清檢測(cè)（Mac - ELISA）中的應(yīng)用。Mac - ELISA 檢測(cè)登革熱血清時(shí)，對(duì)移液精度與效率要求較高。Pipetty 電動(dòng)移液器憑借獨(dú)特優(yōu)勢(shì)脫穎而出，其內(nèi)置溫度傳感器，能依據(jù)溫度自動(dòng)校正分配量，規(guī)避手溫干擾，保障移液精度。連續(xù)分液功能可將設(shè)定液量多次等量排出，極大提升 96 孔板等加樣效率。且該移液器輕巧便攜，操作方式多樣，可顯著減輕實(shí)驗(yàn)人員負(fù)擔(dān)，助力登革熱血清檢測(cè)高效、精準(zhǔn)開(kāi)展，有力推動(dòng)相關(guān)檢測(cè)工作的順利進(jìn)行 。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
      根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，利用抗人μ鏈單克隆抗體捕獲待檢測(cè)血清中的IgM，再加入特異性抗原和相應(yīng)酶標(biāo)單克隆抗體，加底物顯色。顯色程度與特異性IgM抗體含量呈正相關(guān)。
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-02-1000及配套吸頭。
② 洗板機(jī)。
③ 酶標(biāo)儀。
④ 恒溫溫箱或水浴箱(37℃±2℃)。
⑤ 10mL 吸管。
⑥ 稀釋血清用的試管。
⑦ 吸水紙。
 
2、試劑和材料
① 登革病毒 IgM 抗體捕捉 ELISA 診斷試劑盒。
② 蒸餾水或去離子水。
③ TMB（四甲基聯(lián)苯胺）。
④ 病人標(biāo)本。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、使用Pipetty電動(dòng)移液器，設(shè)置混勻模式，將陰、陽(yáng)性對(duì)照血清，臨界值較準(zhǔn)血清和待檢血清按照試驗(yàn)需求稀釋成1：100；吸取所需量的純化登革病毒抗原和等體積辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記單克隆抗體轉(zhuǎn)移至干凈的試管中，自動(dòng)混勻后置室溫作用 1h；
 
2、使用一鍵混勻功能，混合好標(biāo)記單克隆抗體和抗原后，在 10min 內(nèi)各吸取100μL稀釋好的病人標(biāo)本和對(duì)照血清至測(cè)試板上相應(yīng)的微孔中，37℃作用 1h；
 
3、用Pipetty棄掉血清后，用洗滌液重復(fù)洗滌6次，吸水紙上扣干，使用連續(xù)分液功能，分別加100μL上述作用好的登革病毒抗原和酶標(biāo)單克隆抗體復(fù)合物，37℃作用 1h；
4、棄登革病毒抗原和酶標(biāo)單克降抗體復(fù)合物，用洗滌液重復(fù)洗滌6次，吸水紙上扣干，使用連續(xù)分液功能，每孔加入100 μL的 TMB（四甲基聯(lián)苯胺），室溫作用 10min 充分顯現(xiàn)藍(lán)色后，每孔加入 100 μL的終止液，一鍵混勻；
5、在 30min 內(nèi)于450nm 波長(zhǎng)處讀取每孔的吸光度。
 
四、試驗(yàn)結(jié)果
判斷標(biāo)準(zhǔn)為：在NC/C0<1且PC/C0>1的情況下，若S/C0<0.9，則結(jié)果為陰性，若S/C0>1.1，則結(jié)果為陽(yáng)性，若S/C0=0.9~1.1，則標(biāo)本需重做。
注：S為待檢血清的吸光度；NC為陰性對(duì)照血清的吸光度；PC為陽(yáng)性對(duì)照血清的吸光度；C0為臨界較準(zhǔn)血清的吸光度平均值。