Pipetty電動(dòng)移液器在登革熱血清檢測(cè)（ELISA）中的應(yīng)用

方案摘要：本方案著重探討 Pipetty 電動(dòng)移液器在登革熱血清 ELISA 檢測(cè)中的具體應(yīng)用。在采用 ELISA 法檢測(cè)登革熱血清時(shí)，Pipetty 電動(dòng)移液器憑借自身一系列獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，在這類(lèi)檢測(cè)場(chǎng)景中展現(xiàn)出顯著價(jià)值，它配備了內(nèi)置溫度傳感器，能夠根據(jù)環(huán)境溫度自動(dòng)對(duì)分配量進(jìn)行校正，有效避免了操作人員手溫對(duì)移液精度造成的干擾，從而始終保證移液結(jié)果的準(zhǔn)確性。其具備的連續(xù)分液功能，可將預(yù)設(shè)的液量多次等量排出，這一特點(diǎn)在處理 96 孔板等加樣操作時(shí)，能大幅提升工作效率。此外，該移液器設(shè)計(jì)輕巧、便于攜帶，且支持多種操作方式，能夠明顯減輕實(shí)驗(yàn)人員的操作負(fù)擔(dān)，為登革熱血清檢測(cè)工作的高效、精準(zhǔn)開(kāi)展提供有力支持，進(jìn)而推動(dòng)相關(guān)檢測(cè)任務(wù)的順利推進(jìn)。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
      根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，用純化的登革病毒基因工程表達(dá)抗原包被塑料板，與稀釋的待檢血清中的特異性抗體結(jié)合，其中血清IgM部分又與后加入的酶標(biāo)記的抗人IgM結(jié)合，通過(guò)酶與底物的作用產(chǎn)生可見(jiàn)的顏色反應(yīng)，顯色程度與特異性IgM抗體含量呈正相關(guān)。
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-03-250、MSIC01-02-1000及配套吸頭。
② 洗板機(jī)。
③ 酶標(biāo)儀。
④ 恒溫溫箱或水浴箱(37℃±2℃)。
⑤ 10mL 吸管。
⑥ 稀釋血清用的試管。
⑦ 吸水紙。
 
2、試劑和材料
① 登革病毒 IgM 抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒。
② 蒸餾水或去離子水。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、將檢測(cè)血清用樣品稀釋液做 1∶50 稀釋。（先使用Pipetty電動(dòng)移液器將 10 μL 血清加入到 90μL 的樣品稀釋液中，設(shè)置混勻模式，一鍵混勻，再將 1∶10 的稀釋血清用樣品稀釋液做1:5稀釋充分混勻。標(biāo)本稀釋后應(yīng)在 2h內(nèi)使用。)
 
2、將濃縮洗滌液加入 720mL（96T）蒸餾水中混勻備用。
3、取出已包被板，設(shè)置連續(xù)分液模式，加入已稀釋血清 100μL/孔，同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照及空白對(duì)照各2孔（陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別直接加入相應(yīng)對(duì)照血清 100μL/孔，空白對(duì)照加入洗滌液 100μL/孔），振蕩均勻后，于 37℃水浴箱溫育 40min。
 
4、溫育后，甩去板內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置 1min后甩干，重復(fù)洗滌5次，扣干。5、使用Pipetty電動(dòng)移液器的連續(xù)分液模式，加入酶標(biāo)記物 50μL/孔（空白孔不加），振蕩均勻后，于 37℃水浴箱溫育 30min。
 
6、溫育后，甩去板內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置1min后甩干，重復(fù)洗滌5次，扣干。7、每孔加入底物 A、B 液名 50μL，37℃避光顯色 10min，再加入終止液 50μL/孔，于 450mm 測(cè)OD 值。
 
四、試驗(yàn)結(jié)果
臨界值（cut-off）=0.2+陰性對(duì)照均值（N<0.05 時(shí)，按0.05計(jì)算）。樣品0D值大于臨界值為陽(yáng)性，樣品0D值小于臨界值為陰性。樣品0D值在臨界值正負(fù)10%范圍內(nèi)為可疑，建議用其他方法復(fù)試。