Pipetty在動(dòng)物布魯氏菌病檢測(cè)（常量法補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)）中的應(yīng)用

方案摘要：本方案聚焦 Pipetty 電動(dòng)移液器在動(dòng)物布魯氏菌病常量法補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中的應(yīng)用，在精準(zhǔn)液體量取與稀釋方面，其可精確設(shè)定移液體積，保障血清、抗原、補(bǔ)體等試劑的量取和稀釋精度，確保反應(yīng)體系各成分比例恒定，減少人為誤差。連續(xù)分液模式則能顯著提高多樣本處理時(shí)的檢測(cè)效率，尤其適用于大規(guī)模檢測(cè)。同時(shí)，該移液器精度穩(wěn)定，無(wú)需頻繁校準(zhǔn)，保障了補(bǔ)體等關(guān)鍵試劑移液的體積精度，避免結(jié)果偏差。​
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
       動(dòng)物布魯氏菌病常量法補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的核心原理，是基于抗原與抗體結(jié)合時(shí)可固定補(bǔ)體的免疫學(xué)特性。試驗(yàn)中，將待檢血清、布魯氏菌抗原、補(bǔ)體按特定比例混合，若血清中存在布魯氏菌抗體，會(huì)與抗原形成免疫復(fù)合物，進(jìn)而固定補(bǔ)體；隨后加入指示系統(tǒng)（如綿羊紅細(xì)胞與溶血素），因補(bǔ)體已被固定，不會(huì)發(fā)生溶血，為陽(yáng)性反應(yīng)；反之則出現(xiàn)溶血，為陰性反應(yīng)。該過(guò)程對(duì)各試劑的量取精度、反應(yīng)體系的均勻性要求嚴(yán)苛。而 Pipetty 電動(dòng)移液器的精準(zhǔn)移液、自動(dòng)混勻等功能，恰好能滿(mǎn)足這些需求，為試驗(yàn)的順利進(jìn)行和結(jié)果的可靠性提供保障。
 
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① 水浴鍋（溫控范圍為 37 ℃~38 ℃和 54 ℃~64 ℃）。
② Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-02-1000和滅菌移液器吸頭。
③ 內(nèi)口徑 1 cm 玻璃試管。
④ 試管架。
⑤ 稀釋用器皿。
 
2、試劑和材料
① 稀釋液：巴比妥緩沖液（1X）或不含巴比妥緩沖液。
② 綿羊紅細(xì)胞懸液，除使用商品化綿羊紅細(xì)胞外，也可單獨(dú)制備。
③ 布魯氏菌陽(yáng)性對(duì)照血清和陰性對(duì)照血清。
④ 溶血素，在有效期內(nèi)根據(jù)說(shuō)明書(shū)標(biāo)示效價(jià)使用。
⑤ 補(bǔ)體，每次補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)于當(dāng)日測(cè)定補(bǔ)體效價(jià)。優(yōu)先使用商品化凍干補(bǔ)體，也可使用新鮮豚鼠血清作為補(bǔ)體。
⑥ 抗原，在有效期內(nèi)根據(jù)說(shuō)明書(shū)標(biāo)示效價(jià)進(jìn)行使用。
⑦ 溶血標(biāo)準(zhǔn)比色管。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、以常規(guī)方法采血和分離血清，常量法用稀釋液將血清作1:10稀釋?zhuān)�微量法用稀釋液將血清�?：3 稀釋?zhuān)?5 μL血清加 75 μL稀釋液）。按表 H.10 對(duì)稀釋的血清進(jìn)行滅活。
 
2、每次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性血清對(duì)照、陰性血清對(duì)照、抗原對(duì)照，溶血素對(duì)照和補(bǔ)體對(duì)照。試驗(yàn)各要素添加量和順序見(jiàn)表4，具體步驟如下。
a） 使用Pipetty電動(dòng)移液器，將滅活后的待檢血清與稀釋液自動(dòng)混勻，1:10稀釋后，等量加入2支玻璃試管內(nèi)，每管 500μL。
b） 其中一管加工作濃度抗原 500 μL，另一管加稀釋液 500 μL。
e） 上述兩管均加工作濃度補(bǔ)體，每管 500 μL，自動(dòng)混勻。
d） 置 37 ℃水浴 20 min，取出，放于室溫（22 ℃±4 ℃）環(huán)境中。每管各加2單位的溶血素 500 μL和 2.5% 紅細(xì)胞懸液 500 μL。充分振蕩混勻。
e） 置 37 ℃水浴 20 min，取出，立即進(jìn)行第一次判定。
 
 
四、結(jié)果判定
1、同時(shí)滿(mǎn)足下列條件，判定試驗(yàn)成立。
a）第一次判定，不加抗原的陽(yáng)性血清對(duì)照管、不加或加抗原的陰性血清對(duì)照管、抗原對(duì)照管呈完全溶血反應(yīng)。
b）第一次判定靜置 12h后，作第二次判定。第二次判定時(shí)，溶血素對(duì)照管、補(bǔ)體對(duì)照管應(yīng)呈完全抑制溶血反應(yīng)，即100%不發(fā)生溶血。
2、在試驗(yàn)成立條件下，對(duì)待檢血清進(jìn)行判定。將加抗原的待檢血清管與參照標(biāo)準(zhǔn)比色管進(jìn)行比色，記錄結(jié)果。牛、羊和豬補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)均相同，判定標(biāo)準(zhǔn)如下:
a）溶血抑制程度<50%，判為陽(yáng)性；
b）溶血抑制程度 50%~<100%，判為可疑；
c）溶血抑制程度為100%，判為陰性。