Pipetty在動物布魯氏菌病檢測（常量法補體結(jié)合試驗）中的應用

方案摘要：本方案聚焦 Pipetty 電動移液器在動物布魯氏菌病常量法補體結(jié)合試驗中的應用，在精準液體量取與稀釋方面，其可精確設定移液體積，保障血清、抗原、補體等試劑的量取和稀釋精度，確保反應體系各成分比例恒定，減少人為誤差。連續(xù)分液模式則能顯著提高多樣本處理時的檢測效率，尤其適用于大規(guī)模檢測。同時，該移液器精度穩(wěn)定，無需頻繁校準，保障了補體等關(guān)鍵試劑移液的體積精度，避免結(jié)果偏差。​
 
方案詳情：
一、實驗原理
       動物布魯氏菌病常量法補體結(jié)合試驗的核心原理，是基于抗原與抗體結(jié)合時可固定補體的免疫學特性。試驗中，將待檢血清、布魯氏菌抗原、補體按特定比例混合，若血清中存在布魯氏菌抗體，會與抗原形成免疫復合物，進而固定補體；隨后加入指示系統(tǒng)（如綿羊紅細胞與溶血素），因補體已被固定，不會發(fā)生溶血，為陽性反應；反之則出現(xiàn)溶血，為陰性反應。該過程對各試劑的量取精度、反應體系的均勻性要求嚴苛。而 Pipetty 電動移液器的精準移液、自動混勻等功能，恰好能滿足這些需求，為試驗的順利進行和結(jié)果的可靠性提供保障。
 
二、‌實驗準備
1、設配和材料
① 水浴鍋（溫控范圍為 37 ℃~38 ℃和 54 ℃~64 ℃）。
② Pipetty電動移液器MSIC01-02-1000和滅菌移液器吸頭。
③ 內(nèi)口徑 1 cm 玻璃試管。
④ 試管架。
⑤ 稀釋用器皿。
 
2、試劑和材料
① 稀釋液：巴比妥緩沖液（1X）或不含巴比妥緩沖液。
② 綿羊紅細胞懸液，除使用商品化綿羊紅細胞外，也可單獨制備。
③ 布魯氏菌陽性對照血清和陰性對照血清。
④ 溶血素，在有效期內(nèi)根據(jù)說明書標示效價使用。
⑤ 補體，每次補體結(jié)合試驗時，應于當日測定補體效價。優(yōu)先使用商品化凍干補體，也可使用新鮮豚鼠血清作為補體。
⑥ 抗原，在有效期內(nèi)根據(jù)說明書標示效價進行使用。
⑦ 溶血標準比色管。
三、實驗步驟
1、以常規(guī)方法采血和分離血清，常量法用稀釋液將血清作1:10稀釋，微量法用稀釋液將血清作1：3 稀釋（25 μL血清加 75 μL稀釋液）。按表 H.10 對稀釋的血清進行滅活。
 
2、每次試驗應設陽性血清對照、陰性血清對照、抗原對照，溶血素對照和補體對照。試驗各要素添加量和順序見表4，具體步驟如下。
a） 使用Pipetty電動移液器，將滅活后的待檢血清與稀釋液自動混勻，1:10稀釋后，等量加入2支玻璃試管內(nèi)，每管 500μL。
b） 其中一管加工作濃度抗原 500 μL，另一管加稀釋液 500 μL。
e） 上述兩管均加工作濃度補體，每管 500 μL，自動混勻。
d） 置 37 ℃水浴 20 min，取出，放于室溫（22 ℃±4 ℃）環(huán)境中。每管各加2單位的溶血素 500 μL和 2.5% 紅細胞懸液 500 μL。充分振蕩混勻。
e） 置 37 ℃水浴 20 min，取出，立即進行第一次判定。
 
 
四、結(jié)果判定
1、同時滿足下列條件，判定試驗成立。
a）第一次判定，不加抗原的陽性血清對照管、不加或加抗原的陰性血清對照管、抗原對照管呈完全溶血反應。
b）第一次判定靜置 12h后，作第二次判定。第二次判定時，溶血素對照管、補體對照管應呈完全抑制溶血反應，即100%不發(fā)生溶血。
2、在試驗成立條件下，對待檢血清進行判定。將加抗原的待檢血清管與參照標準比色管進行比色，記錄結(jié)果。牛、羊和豬補體結(jié)合反應判定標準均相同，判定標準如下:
a）溶血抑制程度<50%，判為陽性；
b）溶血抑制程度 50%~<100%，判為可疑；
c）溶血抑制程度為100%，判為陰性。