Pipetty電動(dòng)移液器在登革病毒檢測(cè)（免疫熒光法FA/IFA）中的應(yīng)用

方案摘要：登革熱肆虐全球，及時(shí)診斷對(duì)診療和防控至關(guān)重要。本方案基于抗原 - 抗體特異性結(jié)合原理，利用熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)病毒抗原或抗體（IgM/IgG），以血清為樣本，經(jīng)處理、孵育、洗滌后，通過(guò)熒光顯微鏡判讀結(jié)果。檢測(cè)過(guò)程中，Pipetty 電動(dòng)移液器優(yōu)勢(shì)顯著，其內(nèi)置溫度傳感器，可依溫度自動(dòng)校正分配量，排除手溫干擾，保障移液精度；連續(xù)分液功能可將設(shè)定液量多次等量排出，大幅提升 96 孔板等加樣效率。提高早期檢測(cè)效率，助力疫情控制，保障公眾健康。​
 
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
       某些熒光素(常用異硫氰酸熒光素)能與抗體蛋白分子結(jié)合，而不喪失抗體活力，仍能和相應(yīng)的抗原發(fā)生特異免疫反應(yīng)，產(chǎn)生免疫復(fù)合物，這種復(fù)合物由于有熒光色素的參與，在熒光顯微鏡下顯示熒光，表明有特異性抗原存在。直接免疫熒光法可用于檢測(cè)感染細(xì)胞內(nèi)的特異性抗原，間接免疫熒光法可查待檢血清中的特異性抗體。
二、‌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、設(shè)配和材料
① Pipetty電動(dòng)移液器MSIC01-03-250、MSIC01-02-1000及配套吸頭；
② 熒光顯微鏡。
 
2、試劑和材料
① 登革病毒 1~4 型抗原片（登革標(biāo)準(zhǔn)毒株感染 BHK、Vero 或 C6/36細(xì)胞制備，低溫干燥保存）及相應(yīng)單克隆抗體（陽(yáng)性對(duì)照）、陰性血清；
② 羊抗人（免抗人）IgG熒光抗體；
③ 待檢患者血清（急性期和恢復(fù)期）；
④ 常用稀釋液：pH7.2~7.4PBS、伊文斯蘭、封片膠等；
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、取出抗原片，冷風(fēng)吹干；
2、用 PH7.2~7.4 PBS 稀釋待檢血清，使用Pipetty自動(dòng)混勻功能，從1∶20開始，對(duì)倍稀釋至所需稀釋度；
 
3、用Pipetty依次從高稀釋度向低稀釋度逐個(gè)加入稀釋的待檢血清于四個(gè)型的登革病毒抗原片孔中，每型各加2孔待檢系列稀釋血清，血清量以完全覆蓋抗原面而不溢出孔外為準(zhǔn)，置濕盒內(nèi)，在 37℃水浴孵育 30min（每次試驗(yàn)同時(shí)作陰、陽(yáng)性對(duì)照）;
4、用 pH7.2~7.4 PBS 漂洗3次，每次約 30s~1min，再用蒸餾水洗1次，冷風(fēng)吹干；
5、用 pH7.2~7.4 PBS 稀釋熒光抗體，使其內(nèi)含 2個(gè)工作單位和 1∶8000 伊文斯蘭的熒光抗體，加入各孔中，使完全覆蓋抗原面，置濕盒中，37℃水浴作用30min，取出，同上漂洗及吹干；
6、用封片膠（或甘油緩沖液）封片，熒光顯微鏡觀察結(jié)果。
四、試驗(yàn)結(jié)果判讀
特異性熒光呈黃綠色顆粒，分布在感染細(xì)胞漿中。根據(jù)熒光亮度和陽(yáng)性細(xì)胞在細(xì)胞總數(shù)中所占的比，無(wú)熒光者為“-”。檢測(cè)抗體滴度時(shí)，以特異熒光達(dá)“++”例可將熒光反應(yīng)大致區(qū)分為“+~++++”最高血清稀釋度的倒數(shù)表示。