瑞孚迪推出新品pHSense™ Eu敏感型探針量化ADC內(nèi)吞

來(lái)源：瑞孚迪生命科學(xué)
作者：芝士拉滿

在腫瘤治療領(lǐng)域，抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）正成為精準(zhǔn)醫(yī)療的明星選手，目前全球已有15款A(yù)DC藥物獲批，全球在研ADC藥物數(shù)量龐大，中國(guó)藥企研發(fā)管線占全球40%以上。ADC藥物憑借精準(zhǔn)治療優(yōu)勢(shì)和持續(xù)的技術(shù)創(chuàng)新，未來(lái)將成為全球抗腫瘤藥物市場(chǎng)的重要支柱。

ADC藥物的核心在于其獨(dú)特的三部曲設(shè)計(jì)，抗體負(fù)責(zé)靶向識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面抗原。連接子連接抗體與細(xì)胞毒性藥物。細(xì)胞毒素，如微管抑制劑（MMAE）、DNA損傷劑（DM1）等在細(xì)胞內(nèi)釋放，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。

ADC藥物的作用機(jī)制可概括為以下四個(gè)步驟：
靶向結(jié)合：抗體與腫瘤細(xì)胞表面抗原結(jié)合，形成ADC-抗原復(fù)合物
內(nèi)吞作用：ADC復(fù)合物通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被內(nèi)化
藥物釋放：內(nèi)體與溶酶體融合，酸性環(huán)境下ADC降解并釋放細(xì)胞毒素
細(xì)胞凋亡：藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，同時(shí)可通過(guò)旁觀者效應(yīng)影響鄰近細(xì)胞

圖片來(lái)源：Iris-biotech

在ADC藥物研發(fā)中，內(nèi)吞作用至關(guān)重要。內(nèi)吞作用不僅影響藥物的釋放效率，還決定了藥物是否能夠發(fā)揮旁觀者效應(yīng)，以及是否會(huì)導(dǎo)致劑量限制毒性。此外，內(nèi)吞作用的效率和途徑與ADC的療效密切相關(guān)，因此在藥物研發(fā)早期階段需要篩選出具有最佳內(nèi)吞特性的ADC分子。

瑞孚迪（Revvity）推出全新方案pHSense™ pH敏感型Eu探針用于量化ADC內(nèi)吞
pHSense™ Eu探針是瑞孚迪近期推出的新一代鑭系銪穴狀化合物，專為內(nèi)化研究而開(kāi)發(fā)。它具有獨(dú)特的二維pH敏感性，當(dāng)pH值為中性/堿性時(shí)，其620nm發(fā)射光信號(hào)非常低，而當(dāng)pH值下降至酸性時(shí)，620nm發(fā)射光信號(hào)強(qiáng)度顯著上升。除此之外，620nm發(fā)射光的壽命也會(huì)隨pH值變化而改變，趨勢(shì)表現(xiàn)為隨著pH值下降，620nm發(fā)射光壽命延長(zhǎng)，因此可實(shí)現(xiàn)時(shí)間分辨熒光（TRF)檢測(cè)。憑借獨(dú)特的二維pH靈敏度特性，pHSense™ Eu探針可實(shí)現(xiàn)高靈敏、高檢測(cè)窗口的ADC抗體內(nèi)吞檢測(cè)。

適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的精簡(jiǎn)型內(nèi)吞作用檢測(cè)流程
瑞孚迪提供即用型pHSense™ Eu Fab anti human/mouse IgG，可特異性識(shí)別人或小鼠IgG抗體的Fc片段，實(shí)現(xiàn)抗體的標(biāo)記。標(biāo)記過(guò)程無(wú)需額外的分離純化步驟，只需15-30分鐘即可完成標(biāo)記，可實(shí)現(xiàn)方便靈活的抗體內(nèi)化高通量篩選。

整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程僅需四步，且只需在細(xì)胞培養(yǎng)板操作即可。以貼壁細(xì)胞為示例，步驟為：細(xì)胞過(guò)夜培養(yǎng)-棄培養(yǎng)基上清-加ADC&Fab-Eu預(yù)混物-讀數(shù)，全程無(wú)需洗滌，支持實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。同時(shí)，獨(dú)家基于酶標(biāo)儀讀取數(shù)值的檢測(cè)形式，大大提高了實(shí)驗(yàn)的效率和通量，且支持96&384-wells通量。

卓越的信噪比，提供更可靠的藥理學(xué)數(shù)據(jù)，適用于抗體以及ADC內(nèi)化
左圖使用2nM的pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG試劑標(biāo)記后的Trastuzumab抗體，加入過(guò)表達(dá)HER2的BT-474細(xì)胞中，37°C孵育，使用酶標(biāo)儀動(dòng)態(tài)檢測(cè)620nm發(fā)射光，隨著時(shí)間可清晰觀察到特異性抗體內(nèi)化信號(hào)，而Irrelevant IgG1和Fab Only對(duì)照組隨著時(shí)間推移信號(hào)保持不變，且始終表現(xiàn)出極低的背景信號(hào)。

右圖使用pHSense™ Eu Fab anti-Human lgG試劑標(biāo)記不同濃度的Enfortumab-vedontin ADC，加入表達(dá)了Nectin-4的SUM190-PT細(xì)胞中，37°C孵育5小時(shí)后用酶標(biāo)儀檢測(cè)620nm發(fā)射光，檢測(cè)出的EC50值與已發(fā)表文獻(xiàn)一致。

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