English | 中文版 | 手機版 企業(yè)登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 細胞技術專題:大鼠星型膠質細胞培養(yǎng)實驗

細胞技術專題:大鼠星型膠質細胞培養(yǎng)實驗

瀏覽次數(shù):1271 發(fā)布日期:2014-3-3  來源:上海北諾生物科技有限公司

大鼠星型膠質細胞培養(yǎng)可以:(1)用于神經系統(tǒng)發(fā)育、分化及再生等基礎研究;(2)腦缺血預處理上調神經保護蛋白的機制研究;(3)腦損傷和腦疼痛的研究;(4)新蛋白的功能研究。

 

實驗方法
  • 酶消化法
  • 胰酶消化法
  • 胰蛋白酶消化法
實驗材料
試劑、試劑盒
儀器、耗材
實驗步驟
一、分離大鼠胚胎(16-18周)新皮層,置于L-15(或Hank’s平衡鹽/DMEM溶液,無Hepes)培養(yǎng)基中,除去腦膜和血管、海馬、尾核和其他非皮層組織。

二、 用解剖刀將其切成1 mm3大小的組織塊。

三、用1ml槍頭轉移250 μl膠原酶儲存液(1.33%,溶于L-15中)到1ml的L-15(或D-MEM)中。每2只鼠腦組織塊使用1-1.5 ml稀釋膠原酶液。

四、37℃水浴中孵育30 min。

五、1 000 rpm(大約230g)中離心5 min,或3 000 rpm(大約2 000 g)中離心1 min。

六、去上清。

七、在含EDTA-CMF的溶液中重懸細胞,并與胰蛋白酶以1:4~1:10比例混合?梢愿鶕(jù)觀察到的細胞消化的情況,適當調整兩者的比例。

八、加入胰蛋白酶的抑制劑和DNase溶液,混合5分鐘。

九、1 000 rpm(大約230 g)中離心5 min,或3 000 rpm(大約2 000 g)中離心1 min。

十、去上清。加入500 μl D-MEM-BS。

十一、輕輕吹打成單細胞懸液,開始用5 ml槍頭吹打10次,在需要時用18-gauge的針頭吹打。( 注意:不要產生氣泡。)200目/300目尼龍網(wǎng)過濾。

十二、將細胞轉移到含10%FCS-DMEM的培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)密度為2X106/25 cm2培養(yǎng)瓶,4~6 X106/75 cm3培養(yǎng)瓶。在37.2℃,37.5%中培養(yǎng)。

十三、第2天換液,以后每隔3天換液。

十四、7-10天,細胞發(fā)生融合。

十五、細胞融合后,將瓶蓋用封口膜密封好,在軌跡搖床上培養(yǎng),旋轉速度以不產生氣泡為宜。37℃振搖過夜。細胞注意避光。

十六、去上清,加入新鮮10%FCS-DMEM。

十七、加入200 μl 1 mM的阿糖胞苷/10 ml培養(yǎng)基。在37.2℃,37.5%中培養(yǎng)孵育48小時以消除分裂的細胞。

十八、換用新鮮10%FCS-DMEM,孵育恢復24小時。

十九、重復17-18步驟,消除所有的分裂細胞
發(fā)布者:上海北諾生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-57730393,15800960770
E-mail:beinuobio@163.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網(wǎng)友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com