實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使用說明

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（fluorescencerquantitive polymerase chain reaction, FQPCR)

在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。

其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同，在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實(shí)現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀＋實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測系統(tǒng)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)勢：

熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的，而普通的PCR儀是做定性分析和擴(kuò)增基因片段，定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作，但是成本太高。

樣品到達(dá)域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值（限制點(diǎn)的循環(huán)數(shù)）。域值應(yīng)設(shè)定在使指數(shù)期的擴(kuò)增效率為最大，這樣可以獲得最準(zhǔn)確，可重復(fù)性的數(shù)據(jù)。如果同時(shí)擴(kuò)增的還有標(biāo)有相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，線性回歸分析將產(chǎn)生一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以用來計(jì)算未知樣品的濃度。

熒光定量PCR儀特點(diǎn)：

1．特異性強(qiáng)：引物和探針的“雙保險(xiǎn)”，避免檢測的假陽性。
2．靈敏度高：分析PCR產(chǎn)物的對數(shù)期，自動化儀器收集熒光信號，避免了許多人為因素干擾。
3．避免污染：全封閉反應(yīng)，無須PCR后處理。
4．實(shí)現(xiàn)定量：運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)品獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)合Ct值進(jìn)行準(zhǔn)確定量。
5．高效低耗：可實(shí)現(xiàn)一管多檢。
6．操作簡便：在線式實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增結(jié)果，不必接觸有害物質(zhì)。
7．快速：反應(yīng)時(shí)間<1.5小時(shí)。