ELISA各檢測(cè)方法優(yōu)缺點(diǎn)

ELISA檢測(cè)方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
ELISA實(shí)驗(yàn)所有檢測(cè)方法的缺點(diǎn)：
1、重復(fù)性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽(yáng)性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時(shí)間。

1、直接法（direct ELISA） 

將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。

優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)略，因無(wú)須運(yùn)用二抗可防止交互反響。

缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào)，但不是每種抗體都適合做符號(hào)，費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。

2.間接法（indirect ELISA） 

此測(cè)定辦法與直接法相似，不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào)，改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。

優(yōu)勢(shì)：二抗能夠加強(qiáng)信號(hào)，并且有多種挑選能做不一樣的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它最多的免疫反響性。

缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。

3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA） 

被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶符號(hào)后直接測(cè)定抗原的量；或不符號(hào)，再透過(guò)酶符號(hào)的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇，才可防止交互反響或競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗原聯(lián)系部位。

優(yōu)勢(shì)：高活絡(luò)、高專一性，抗原無(wú)須事前純化。

缺陷：抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。

4.競(jìng)爭(zhēng)法（competitive ELISA） 

樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競(jìng)爭(zhēng)一樣的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過(guò)程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來(lái)與只要固定抗原的對(duì)照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

優(yōu)勢(shì)：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。