ELISA標準曲線重點注意細節(jié)

在ELISA實驗結(jié)束后，我們得到的是經(jīng)酶標儀得出的標準品以及樣本的OD值。其中，標準品的濃度已知，我們可以利用標準品的OD值及其相對應(yīng)的濃度，以O(shè)D值為橫坐標，濃度為縱坐標，做一條標準曲線，并用公式表示出來。這樣，我們把樣本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即樣本濃度。

ELISA標準曲線
 

做ELISA實驗的都知道ELISA標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果，甚至是關(guān)系到ELISA試劑盒實驗的成敗。今天就一起來看下我們在做ELISA標準曲線時需要重點注意的細節(jié)問題。

1. 設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度*陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2. 檢測標準樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
3. 標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要保證有5個點。
4. 做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓�求不同而有所變動，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。
5. 樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
6. 采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。