ELISA各檢測方法優(yōu)缺點

ELISA檢測方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
ELISA實驗所有檢測方法的缺點：
1、重復性不好；
2、收自身抗體、嗜異性抗體等干擾，易出現(xiàn)假陽性；
3、不論儀器和手工操作，干擾因素較多。影響最大的是溫度和時間。

1、直接法（direct ELISA） 

將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。

優(yōu)勢：操作手續(xù)簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。

缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。

2.間接法（indirect ELISA） 

此測定辦法與直接法相似，不一樣在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

優(yōu)勢：二抗能夠加強信號，并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。

缺陷：交互反響發(fā)作的機率較高。

3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA） 

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。

優(yōu)勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。

缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯(lián)系部位。

4.競爭法（competitive ELISA） 

樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當樣品里的自在抗原越多，就能夠聯(lián)系越多的抗體，而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據(jù)呈色區(qū)別就可計算出樣品里的抗原含量。

優(yōu)勢：可適用比擬不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。