冷熱板實(shí)驗(yàn)的測(cè)試方法

實(shí)驗(yàn)介紹

劇烈疼痛常難以控制，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。在疼痛研究的近幾十年歷史中，科學(xué)家一直致力于復(fù)制更能反映人類(lèi)疼痛特性的動(dòng)物模型。這些動(dòng)物模型部分再現(xiàn)了人類(lèi)所表現(xiàn)的疼痛、痛覺(jué)過(guò)敏以及由輕觸、壓覺(jué)等引起的疼痛反應(yīng)等癥狀。這些模型的成功復(fù)制是研究疼痛產(chǎn)生機(jī)制的基礎(chǔ)，為人類(lèi)認(rèn)識(shí)疼痛機(jī)制及篩選更好的治療藥物提供了有效工具。

冷覺(jué)過(guò)敏癥的檢測(cè)是疼痛行為研究中一個(gè)非常重要的方法。冷熱板測(cè)痛儀是一款多功能的熱疼痛閾值測(cè)試儀，適用于大鼠、小鼠麻醉、鎮(zhèn)痛、神經(jīng)性疼痛的藥物篩選，為相關(guān)鎮(zhèn)痛藥物研究服務(wù)。實(shí)驗(yàn)中，將小鼠置于穩(wěn)定在冰上、溫度為4°C的圓形有機(jī)玻璃板上五分鐘。當(dāng)小鼠接觸冷板時(shí)，會(huì)抬起爪子，抬爪次數(shù)反映動(dòng)物對(duì)冷刺激的反應(yīng)程度，通過(guò)記錄動(dòng)物的反應(yīng)時(shí)間（跳躍或舔腳行為）可評(píng)估它們對(duì)熱或冷的疼痛反應(yīng)。目前用于檢測(cè)疼痛的冷板設(shè)備主要為冷熱板測(cè)痛儀，可根據(jù)溫度變化調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)冷刺激或熱刺激。

設(shè)備說(shuō)明

鎮(zhèn)痛儀基于金屬板設(shè)計(jì)，該板可加熱至55°C并冷卻至-2°C（環(huán)境溫度需在20°C至25°C之間）。電子恒溫器維持板溫穩(wěn)定，前面板數(shù)顯溫度計(jì)顯示板面溫度。冷熱板設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單且升溫降溫迅速（從環(huán)境溫度降至4°C，或升至閾值溫度用時(shí)不超過(guò)10分鐘；從4°C升至55°C需5分鐘）。溫度測(cè)量精度為0.5°C。前面板計(jì)時(shí)器顯示動(dòng)物反應(yīng)所需秒數(shù)。

裝置由一個(gè)置于250 × 280 × 150 (mm) 帶蓋有機(jī)玻璃立方體箱內(nèi)的圓柱形測(cè)試室組成。蓋子固定在測(cè)試室頂部防止小鼠跳出。測(cè)試室底部的小孔用于排出融化的冰水。固定好冰塊后，將一個(gè)2毫米厚的圓形有機(jī)玻璃板緊密放置在測(cè)試室的冰塊上。使用表面溫度傳感器檢測(cè)板面溫度，傳感器置于板面后可在顯示器讀取溫度。冰塊放置5分鐘后，板面溫度穩(wěn)定在4°C。

為測(cè)試小鼠冷感覺(jué)過(guò)敏癥，將小鼠放在冰板上，計(jì)算小鼠抬爪的頻率和時(shí)間以進(jìn)行評(píng)估。
 

為評(píng)估此方法，常用于測(cè)試三種小鼠疼痛模型：福爾馬林試驗(yàn)、慢性收縮性損傷（CCI）等。當(dāng)冷熱板測(cè)痛儀板面溫度設(shè)定為4℃時(shí)，對(duì)坐骨神經(jīng)病理性疼痛模型動(dòng)物，受試藥物能明顯改變其在冷板上的抬足時(shí)間和次數(shù)。當(dāng)板面溫度設(shè)定為55℃時(shí)，能準(zhǔn)確測(cè)量動(dòng)物的生理性痛閾高低，以此判定受試藥物的鎮(zhèn)痛類(lèi)型和效果。為評(píng)估小鼠對(duì)有害冷的反應(yīng)，將其置于有機(jī)玻璃室的冷熱板儀器上（板溫0°C），錄像3分鐘。

三、程序說(shuō)明

冷板試驗(yàn)中，嚙齒動(dòng)物爪子的收縮被視為刺激反應(yīng)。該試驗(yàn)有助于了解冷異感和痛覺(jué)減退。冷板溫度設(shè)定為5°C。截止?jié)摲�期�?0秒。將大鼠放入冷板裝置到后爪抬起反應(yīng)之間的時(shí)間記錄為反應(yīng)時(shí)間（大鼠組測(cè)量第一次收回后爪的反應(yīng)）。在暴露于CCI的大鼠組中，受傷的后爪在所有情況下最先做出反應(yīng)。冷板溫度保持5°C，截止?jié)摲��?0秒。將大鼠放在冷板上，記錄其抬起后爪的時(shí)間。在每種情況下，受傷的爪子總是最先反應(yīng)。動(dòng)物帶離籠子以進(jìn)行疼痛刺激測(cè)試。

四、程序步驟

1. 建議先讓動(dòng)物適應(yīng)測(cè)試室環(huán)境。
2. 使用前，用認(rèn)可的消毒劑清潔冷盤(pán)表面。
3. 將冷盤(pán)表面冷卻至實(shí)驗(yàn)所需溫度范圍。
4. 將動(dòng)物放入測(cè)試儀器。動(dòng)物一般活動(dòng)受限，但未受物理束縛。
5. 記錄動(dòng)物出現(xiàn)爪縮、抖動(dòng)或跳躍（較少見(jiàn)）等痛覺(jué)反應(yīng)的潛伏期。一旦觀察到明確反應(yīng)，立即移走動(dòng)物。
6. 如果在20秒內(nèi)未觀察到反應(yīng)，則移走動(dòng)物。
7. 動(dòng)物在無(wú)拘束狀態(tài)下進(jìn)行測(cè)試，能準(zhǔn)確反映痛覺(jué)行為。可對(duì)行為潛伏期及固定時(shí)間內(nèi)的舔足次數(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)。